江苏省“333工程”培养资金资助项目(BRA2013137)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：焦志军王文红熊御云刘美红刘强更多>>
- 相关机构：江苏大学附属医院江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省“333工程”培养资金资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无需抽提RNA直接定量血浆microRNAs的实时荧光定量PCR方法的建立与评价被引量：1
- 2014年
- 目的建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs（miRNAs）作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA—K，抗凝静脉血并分离血浆，取7．5μl血浆用等量含2．5％（体积比）Tween20的缓冲液处理后进行逆转录及PCR，建立血浆miRNAs直接检测法。用该方法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR--4634表达水平，评估其扩增的特异性和扩增效率。同时与传统的抽提RNA定量PCR检测法的阈值循环数（cq）值进行比较并作相关性分析。另外，应用建立的血浆直接检测法，比较了混合引物和单个引物逆转录法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR-4634结果的一致性。结果血浆直接检测法融解曲线显示健康人血浆标本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634扩增产物分别在8l、83、84．2℃时出现单一峰，无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆直接检测法检测miR．24—1—5p扩增效率为1．1，同一份样本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634这3种基因的扩增曲线平行，说明扩增斜率一致。直接检测法检测miR-4634的cq值为30．98±0．17，高于RNA抽提法的29．22±0．21，差异有统计学意义（t=8．475，P〈0．01），而2种方法检测u6（直接检测法32．43±0．08，RNA抽提法32．57±0．06；t=1．354，P〉0．05）、miR-24—1-5p（直接检测法20．73±0．14，RNA抽提法21．064-0．21；t=1．749，P〉0．05）结果差异均无统计学意义。2种方法检测U6（r=0．8605，P〈0．01）、miR．24—1—5p（r=0．7289，P〈0．05）和miR-4634（r=0．7485，P〈0．01）结果具有较好的相关性。混合引物和单个引物逆转录后PCR的cq值之间无明显差异。结论建立的血浆直接检测法只需对血浆标本进行简单的预处理，并可使用混合引物进行逆转录定量PCR，具有操作简便、检测成本低等优点，值得进一步推广应用。（中华
- 张莹莹焦志军段唐海刘美红王文红陈艳刘强熊御云
- 关键词：微RNAS实时聚合酶链反应血浆
- 小鼠CD4^+T细胞活化后4种microRNAs的表达分析
- 2016年
- 目的:研究小鼠脾脏CD4^+T淋巴细胞活化后微小RNA(microRNA,miRNA)的表达水平。方法:采用CD3/CD28免疫磁珠法刺激培养小鼠脾脏CD4+T细胞24 h,应用流式细胞术检测刺激前后CD4^+T细胞的活化率,使用实时荧光定量PCR技术分别检测培养0 h,6 h,12 h以及24 h后的CD4+T细胞中miR-181d、miR-342-3p、miR-9、miR-122-3p的表达水平。结果:CD3/CD28免疫磁珠法刺激培养24 h后CD4+T细胞活化率由5.2%升高至60.9%,差异有统计学意义(t=22.01,P<0.01)。与培养0 h相比,miR-181d和miR-342-3p在经刺激培养6 h,12 h和24 h后的CD4^+T细胞中的表达水平均明显降低(P<0.05),而miR-9和miR-122-3p的表达各组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:小鼠脾脏CD4^+T细胞活化后,miR-181d和miR-342-3p的表达明显下调。
- 严佳婧王文红许秋桂朱波姜扬冯驰汪晶莹焦志军
- 关键词：CD4+T细胞活化
