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软骨藻酸间接竞争ELISA检测方法的研究被引量：2: 2011年; 为研究满足海产品日常分析的免疫检测法,采用自行制备的软骨藻酸多抗隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,分别摸索了抗原、一抗、二抗的最佳使用浓度及温育温度与时间,并用该方法测定了贝类样品中的DA含量.结果表明,该方法最低检测限约为18 ng·mL-1,贝类样品测定的加标回收率在47.2%—94.2%之间.RSD在12.3%—17.0%之间.所购买3种的贝类样品中均无DA检出.; 刘元嫄高利利程金平王茜王文华; 关键词：软骨藻酸间接竞争ELISA 多克隆抗体

抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建被引量：4: 2010年; 为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量单抗,捕获EL ISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果显示,成功构建2株能稳定分泌DA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2B1和4C2,抗体亚类分别为IgG1和IgG2a,间接EL ISA检测小鼠腹水的抗体效价达1∶64 000,腹水纯化后蛋白浓度为1.27和0.675 mg/mL。研究结果表明,成功制备的抗DA单克隆抗体杂交瘤细胞株稳定、高效,为利用该单抗研制快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条打下基础。; 高利利刘元嫄程金平王茜王文华; 关键词：软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株

市售贝类麻痹性贝毒快速生化检测方法探究: 2010年; 为了研究快速检测海产品中低浓度麻痹性贝毒(paralytic shellfish poisoning,PSP)的生化方法,在传统小白鼠法的基础上,使用浓度(以STXeq计)为1和0.2μg/kg的市售双壳贝类PSP提取液对小鼠进行腹腔注射,分别研究暴露15、60、120min后小鼠血液中ACh、AChE、NO和NOS的变化情况.结果发现,低浓度(0.2μg/kg)、短时间(15min)条件下仅ACh含量发生显著变化[与对照组相比p<0.05,含量(以蛋白计)为(141.2±14.8)μg/mg];而NO与NOS却在长时间(120min)暴露后才发生改变[与对照组相比p<0.05,分别为(68.7±3.8)μmol/g及(40.1±4.9)U/mg].在高浓度下,3个时间点的ACh含量也均发生显著变化.结果表明,在低浓度及短时间条件下反映PSP效应的指标仅是ACh,从而可以尝试选择其作为快速检测PSP的生化指标.; 刘元嫄程金平高利利王金辉宋玉玲陈雪王文华; 关键词：麻痹性贝毒生化指标双壳贝类

直接竞争ELISA法检测贝类样品中的记忆缺失性贝毒软骨藻酸: 利用直接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)对我国东海海域的部分贝类样品进行检测。通过酶标抗原和抗体的特异性反应建立检测方法,检出限为24.85 ng·mL,同时测定四种样品的加标回收率,结果分别为119.2%,146.2%...; 王茜程金平高利利董宇席磊; 文献传递

软骨藻酸直接竞争ELISA方法的建立及优化被引量：5: 2012年; 为建立软骨藻酸(domoic acid,DA)直接竞争ELISA方法快速检测样品中的软骨藻酸,本研究利用碳化二亚胺法将辣根过氧化物酶(HRP)标记软骨藻酸(DA),成功制得偶联物DA-HRP.在前期已制得抗软骨藻酸单克隆抗体的基础上,利用酶标抗原和单克隆抗体的特异性反应,对软骨藻酸进行定量分析.通过对封闭液、封闭时间和温育温度的优化,建立标准曲线.结果表明以1%明胶作为封闭液,在37℃下封闭1 h,加入单抗37℃温育1 h是直接竞争ELISA法的最佳反应条件,方法检出限为3.58 ng.mL-1,孔间变异系数均≤15%,加标回收率为80%～120%,检测速度较快,1.5 h内可检测出一批样品,适用于现场和批量检测,具有广泛的发展前景.; 王茜程金平高利利董宇席磊; 关键词：抗原

软骨藻酸多克隆抗体的制备: 2010年; 为建立软骨藻酸(DA)的免疫检测法,本研究采用活泼酯法将DA与载体蛋白KLH(BSA)偶联形成完全免疫抗原(包被抗原),并通过紫外光谱扫描证明偶联成功与否。用完全免疫抗原DA-KLH对新西兰白兔进行免疫,间接ELISA法测定血清效价。实验结果表明偶联成功,经过19周免疫后血清效价达到1:1600,纯化后获得效价为1:800的多克隆抗体,同时也间接证明了合成的完全抗原具有免疫原性,为以后建立免疫分析法奠定了基础。; 刘元嫄程金平高利利徐玮吴浩东; 关键词：软骨藻酸多克隆抗体

记忆缺失性贝毒软骨藻酸的污染现状及检测技术被引量：7: 2011年; 阐述软骨藻酸的主要检测技术——小白鼠生物检测法、高效液相色谱(HPLC)检测法、毛细管电泳检测法、酶联免疫吸附法等方法,对国内外前沿研究技术和优化过程进行详细说明,总结各种方法的利弊,并对未来软骨藻酸的毒理研究和检测分析进行展望。; 王茜程金平高利利董宇王文华; 关键词：软骨藻酸贝类

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上海市科委科技攻关项目(08DZ1206302)