国家质检总局科技计划项目(2012IK170)
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 相关作者：李莉王殿夫何平冯华炜董雪更多>>
- 相关机构：辽宁出入境检验检疫局辽东学院中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目沈阳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌毒力基因被引量：8
- 2016年
- 目的建立同时检测副溶血性弧菌毒力基因tdh和trh的双重荧光PCR方法。方法筛选副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因的特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度实验,并对本实验室保存的54株副溶血性弧菌进行tdh、trh毒力基因的检测,以了解不同来源的副溶血性弧菌携带毒力基因的状况。结果建立的双重荧光PCR方法特异度强(100%),最低检测浓度达到20 cfu/ml,对本实验室保存的副溶血性弧菌进行毒力基因的检测结果显示,从临床分离的10株副溶血性弧菌和海产品样品中分离的1株副溶血性弧菌均为tdh扩增阳性,trh扩增阴性。结论所建立的方法特异性好,灵敏度高,适用于副溶血性弧菌的毒力基因检测。
- 高世光李莉冯华炜于洋麻丽丹
- 关键词：副溶血性弧菌TAQMAN探针
- 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱用于致病性弧菌鉴定被引量：2
- 2019年
- 采用致病性弧菌标准菌株和分离菌株,在规定的培养条件和检测方法下进行MALDI-TOF-MS检测,同时进行方法的重复性、稳定性和特异性分析。新增加致病性弧菌菌株包括12种致病性弧菌,菌株来源广泛,构建的致病性弧菌MALDI-TOF-MS数据库信息量大、特异性强。结果表明,MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定致病性弧菌,可以用于致病性弧菌的日常检测鉴定。
- 王青王殿夫董雪冯华炜麻丽丹朱金艳
- 关键词：MALDI-TOF-MS致病性弧菌海产品
- 脉冲场凝胶电泳分子分型方法用于霍乱弧菌相关性分析
- 2012年
- 目的用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型方法,分析辽宁丹东和广东珠海两地区从水体和水产品中分离的霍乱弧菌之间的相关性。方法对39株霍乱弧菌用内切酶Not I酶切DNA后进行PFGE分子分型,并在0.5×TBE电泳缓冲液中加入终浓度为3.8 mg/L的硫脲溶液电泳。结果所有39株霍乱弧菌的基因组DNA显示出良好的分型结果,从朝鲜排污口、丹东鸭绿江水体中的鲫鱼、河蟹以及丹东排污口分离出的霍乱弧菌之间的相似度达到100%,说明这些产品之间应为同一个污染源;珠海的大头鱼和鳙鱼之间的相似度达到100%,说明这两者之间应为同一个污染源;珠海鲫鱼中检出的霍乱弧菌和鸭绿江水体中检出的霍乱弧菌之间的相似度达到88.4%,说明这两者之间可能为同一个污染源。结论PFGE技术适用于霍乱弧菌环境样品分离菌株的相关性分析和传染源的追踪。
- 于晓婕麻丽丹杨帆刁保卫
- 关键词：霍乱弧菌分子分型水体水产品脉冲场凝胶电泳
- 弗尼斯弧菌PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2018年
- 弗尼斯弧菌(Vibrio furnissii)是近年来国内外学者公认的新食源性致病菌,对全球公共卫生和食品安全造成潜在威胁。本研究根据弗尼斯弧菌的toxS基因分别设计了普通PCR引物和实时荧光PCR引物、探针,建立了用于弗尼斯弧菌快速检测的普通PCR方法和实时荧光PCR方法,对这2种方法的特异性和灵敏度进行比较分析。研究表明,建立的普通PCR方法和实时荧光PCR方法特异性良好,检测灵敏度分别为2 400和24CFU/mL,2种方法的检测灵敏度分别是传统培养方法的10和1 000倍,同时对384份水产品和食品样品进行检测,共检出6株阳性菌株。本研究建立的基于弗尼斯弧菌toxs基因的2种PCR方法特异性均为100%,灵敏度分别为2 400和24CFU/mL,完全满足了弗尼斯弧菌的检测标准,可应用于食品样品中弗尼斯弧菌的检测。
- 王殿夫何平王青于洋卢福荣冯华炜麻丽丹
- 关键词：实时荧光PCR
- 基于MALDI-TOF MS的弧菌识别能力分析被引量：7
- 2016年
- 目的确定基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)-Biotyper系统对弧菌属细菌的识别能力。方法采用Bruker Microflex LT系统,通过构建30株弧菌的肽质量参考谱库、完善Biotyper数据库;采用77株弧菌对数据库的识别能力进行评价;采用主谱图预测聚类分析揭示其对弧菌属、种水平的区分能力及肽质量谱与菌株毒力的相关性。结果 107株弧菌通过MALDI-TOF MS-Biotyper原数据库系统鉴定,92.5%(99株)为属水平识别,55.1%(59株)为种水平识别。用于外部验证的77株菌搜索Biotyper原数据库和补充完善后的数据库,种水平识别率从53.2%提高至96.1%,提高42.9%;属水平识别率从92.2%提高至100%,提高7.8%;聚类分析显示弧菌属中麦氏弧菌与溶藻弧菌、弗尼斯弧菌肽质量谱特异性差,是造成识别错误的主要因素;聚类信息显示,肽质量谱与霍乱弧菌的产毒性不相关,与副溶血性弧菌毒力不相关。结论 MALDI-TOF MS-Biotyper系统可用于弧菌属、种水平的快速识别。数据库的完善程度是决定种水平识别能力的关键。
- 张慧芳李莉麻丽丹张建中肖迪
- 关键词：弧菌特异性
