国家自然科学基金(310000984)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因在卵巢细胞中的表达
- 2013年
- 目的探讨优化、合成原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因,并构建其哺乳动物表达载体,将基因导入卵巢细胞(CHO)中进行初步表达。方法目的基因经优化后人工合成全长编码区,利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(-)。采用脂质体法稳定转染CHO细胞后应用PCR和RT-PCR法检测Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的整合和表达情况。结果成功构建了Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的表达载体pcDNA3.1-D4,并整合进CHO细胞基因组,实现了该基因在CHO中的表达。结论原生动物Δ4-脂肪酸去饱和酶基因哺乳动物表达载体的成功构建以及Δ4-脂肪酸去饱和酶基因表达后的分析为下一步深入研究Δ4-脂肪酸去饱和酶基因的功能和转基因动物的制作打下了基础。
- 汪坤福朱贵明张涛孙洁江旭东王明富
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞
- 脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定。最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况。结果成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达。结论四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响。
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- 关键词：多不饱和脂肪酸多基因表达载体脂肪酸去饱和酶
