广东省科技计划工业攻关项目(2003A302102)
- 作品数：10 被引量：126H指数：5
- 相关作者：蔡道章曾春史德海李晓峰全大萍更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学广东省第二中医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 壳聚糖与型胶原复合制作组织工程软骨支架及其性能研究被引量：41
- 2005年
- 目的 探讨采用壳聚糖与 型胶原复合制作新型组织工程软骨三维多孔支架的方法,并对其理化性能进行检测。 方法 将精制88%脱乙酰度壳聚糖溶于0 .2 mol/ L 醋酸溶液制成2 %溶液,高纯度猪 型胶原溶于0 .5 m ol/ L醋酸溶液制成1%溶液,两者按4∶1(重量比)充分搅拌混合,采用冷冻干燥法制成壳聚糖与 型胶原复合支架。采用碳化二亚胺/ N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行交联,力学测定比较支架交联前后的强度变化,扫描电镜观察其超微结构,于2、4、6和8周经溶菌酶体外降解实验测定其体外降解性。 结果 制备的复合支架成形良好,交联后其力学强度明显增加。扫描电镜显示壳聚糖与 型胶原成分在支架内分布均匀,支架内孔洞相互连通似海绵状,孔径10 0～2 5 0 μm。各时间段复合支架体外降解较单纯壳聚糖支架快。 结论 壳聚糖与 型胶原复合成功地制作成了三维多孔复合支架。其理化性能及体外降解测定,可以作为支架载体,应用于组织工程软骨的构建。
- 史德海蔡道章周长忍李立华曾春李晓峰
- 关键词：胶原复合壳聚糖性能研究软骨支架三维多孔支架
- IL-1β、IL-6、TNF-α在兔腰椎软骨终板退变中的变化及作用被引量：20
- 2007年
- [目的]研究IL-1β、IL-6、TNF-α在软骨终板退变中的作用。[方法]新西兰白兔24只随机分为实验组与对照组。实验组通过腰椎失稳而诱导了腰椎软骨终板退变动物模型。分别于术后12、24、36周摄腰椎X线片及扫描电镜观察,检测不同时段软骨终板中IL-1β、IL-6、TNF-α含量。[结果]X线片示实验组较对照组钙化明显;B rad-ner指数示椎间隙高度随时间延长而逐渐降低;扫描电镜示实验组软骨终板随时间延长胶原纤维逐渐变细、排列紊乱、出现裂隙,蛋白多糖丢失加剧,上述变化较对照组显著;实验组IL-1β、IL-6、TNF-α含量较对照组增多(P<0.05)。[结论]IL-1β、IL-6、TNF-α在软骨终板退变过程中含量相应增加,提示炎性细胞因子可能在软骨终板退变的形成和发展中起重要作用。
- 刘斌金大地瞿东滨蔡道章
- 关键词：炎性细胞因子腰椎软骨终板退变
- 人骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨应用壳聚糖支架三维立体培养人骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),体外诱导其分化成为软骨细胞的可行性。方法:实验于2004-02/11在中山大学附属第三医院中心实验室完成。相分离法制备三维多孔壳聚糖支架,检测支架的孔隙率、孔径。抽取人骨髓,密度梯度离心法分离纯化,体外培养扩增。将第3代MSCs复合于支架中培养,应用无血清诱导液诱导细胞向软骨细胞分化,通过组织学染色及扫描电镜观察细胞的形态、增殖及功能的改变。结果:通过相分离法可制备出高孔隙率的三维壳聚糖支架,孔隙率达86.5%,孔隙分布均匀且相互连通,平均孔径182μm。诱导分化的MSCs在支架中贴附良好,呈现典型的软骨细胞形态,并有细胞外基质分泌。结论:人MSCs在三维立体培养环境下可诱导分化为软骨细胞,作为种子细胞在组织工程软骨的构建及软骨损伤的修复中有良好的应用价值。
- 曾春蔡道章全大萍布丽斯卢华定李晓峰史德海
- 关键词：干细胞软骨壳多糖
- 纳米P(LLA-b-CL)与犬关节软骨细胞体外生物相容性实验研究被引量：5
- 2009年
- [目的]研究具有纳米结构二嵌段共聚物左旋聚乳酸/聚已内酯(PLLA-b-PCL)与犬关节软骨细胞的体外生物相容性,探讨其作为软骨组织工程支架的可行性。[方法]开环聚合制备PLLA-b-PCL,液-液相分离制备PLLA-b-PCL纳米支架,扫描电镜观察材料结构:分离培养犬膝关节软骨细胞,取第3代软骨细胞接种于PLLA-b-PCL膜进行复合二维培养,MTT法检测细胞毒性;通过倒置显微镜、Hoechst33342荧光法观察细胞的形态与粘附状况;另取第3代软骨细胞与纳米PLLA-b-PCL(实验组)、PLLA-b-PCL(对照组)支架材料上进行三维培养3周,扫描电镜观察软骨细胞的形态、粘附、生长状况,Hoechst33258荧光法检测复合物中细胞DNA含量、BCA法测定蛋白质含量。[结果]PLLA-b-PCL无细胞毒性,软骨细胞在纳米PLLA-b-PCL支架上粘附、增殖良好,随时间延长软骨细胞在支架材料上DNA和蛋白质含量逐渐增加,DNA和蛋白质含量均明显高于对照组(P<0.05)。[结论]PLLA-b-PCL纳米支架能为软骨细胞的生长分化提供较好的环境,具有良好的生物相容性,有望成为一种较好的软骨组织工程支架材料。
- 陈竹生童新明蔡道章刘斌
- 关键词：软骨细胞生物相容性
- TGF-β1缓释载体体外构建组织工程软骨被引量：12
- 2005年
- 目的制备负载TGF-β1壳聚糖缓释微球的三维多孔壳聚糖支架,检测TGF-β1缓释载体对软骨细胞功能的影响。方法乳化交联法制备TGF-β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合,检测其体外降解并通过ELISA法检测微球的载药、释药性能。将软骨细胞置于复合载体中立体培养,通过苏木素伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色、扫描电镜观察复合载体对细胞的增殖、功能的影响。结果缓释微球的TGF-β1包封率达90.1%,并具有良好的药物缓释性能,软骨细胞在复合载体中增殖良好,并能够保持其表型及Ⅱ型胶原分泌功能。结论负载TGF-β1壳聚糖缓释微球的壳聚糖支架作为软骨细胞的载体在组织工程软骨的构建及软骨损伤的修复中有良好的应用前景。
- 曾春蔡道章全大萍廖凯荣卢华定李晓峰史德海
- 关键词：转化生长因子软骨组织工程软骨缓释载体TGF体外构建ELISA法检测
- 细胞因子在体外诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化过程中的作用被引量：3
- 2008年
- 背景:骨髓基质细胞持续稳定地向软骨细胞转化一过程中,物理、化学和生物等诸多因素均发挥着作用,某些因素的共同作用会更有利于细胞的转化,而转化生长因子β1和胰岛素样生长因子等均可诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化。目的:拟验证转化生长因子β1与胰岛素样生长因子在体外联合诱导犬骨髓基质细胞向软骨细胞分化的效果。设计、时间及地点:细胞观察,于2006-05/10在中山大学附属第三医院中心实验室完成。材料:清洁级12月龄雄性成年杂种犬1只,用于分离培养骨髓基质细胞。转化生长因子β1、胰岛素样生长因子I由美国Sigma公司生产。方法:自犬髂后嵴处抽取骨髓10mL,密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,传至第3代,调整细胞密度为2×109L-1。诱导组向细胞内加入含10μg/L转化生长因子β1、50μg/L胰岛素样生长因子I、50mg/L维生素C、10-7mol/L地塞米松、1%ITS-A、100U/mL青霉素、100mg/L链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基。对照组仅加入含10%胎牛血清的高糖DMEM进行常规培养。主要观察指标:诱导后细胞形态学变化。诱导后组织化学及免疫组化检测结果。结果:与对照组比较,第3代骨髓基质细胞成软骨诱导48h后能明显促进细胞集落生长,细胞增殖加快,但细胞形态无变化,仍为长梭形;诱导14d后大部分细胞呈多角形或圆形,折光性增强。诱导后番红O染色、甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化染色均呈阳性表达。结论:转化生长因子β1与胰岛素样生长因子I体外联合诱导可获得骨髓基质细胞源性软骨细胞。
- 陈竹生童新明刘斌蔡道章
- 关键词：骨髓基质细胞软骨细胞转化生长因子Β1胰岛素样生长因子
- TGF-β1壳聚糖缓释微球的制备和体外检测被引量：24
- 2005年
- 【目的】通过制备新型的转化生长因子鄄茁1(TGF鄄茁1)缓释系统,并对其载药、体外释药及降解特性进行检测,评估应用生物可降解壳聚糖微球作为TGF鄄茁1控制释放载体的可行性。【方法】应用三聚磷酸钠(TPP)作为交联剂,以乳化交联法制备具有控制释放功能的负载TGF鄄茁1的壳聚糖微球;以牛血清白蛋白(BSA)作为模板蛋白,应用相同的方法制备负载BSA的微球。应用扫描电镜、微镜粒度分、药物包封率测定、体外药物释放动力学检测等方法分析微球的特性。【结果】制备的微球球形良好,球体表面光滑,具有较高的TGF鄄茁1包封效率90.1%)。持续7d的药物释放试验表明,BSA与TGF鄄茁1两种蛋白均可以从微球中缓慢释放,其中TGF鄄茁1的释放率低于BSA的释放率。溶菌酶溶液降解作用下,4周的体外降解过程中,可见微球质量持续下降并伴有明显的微球形貌改变。【结论】应用乳化交联法可制备负载TGF鄄茁1的壳聚糖缓释微球。这种新型药物控制释放系统在细胞因子的控制释放及软骨组织工程中有潜在的应用价值。
- 曾春蔡道章全大萍布丽斯卢华定李晓峰史德海
- 关键词：壳聚糖缓释微球体外检测
- 猪去抗原半月板体外降解的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的 研究猪去抗原半月板在体外的降解规律，以进一步调整其合适降解速度。方法选用4～6月龄健康小型猪5只，取其双膝关节半月板。一部分采用环氧化物进行去抗原处理，制备成去抗原半月板；另一部分不作任何处理，为新鲜半月板。将两种半月板冻干处理后，置于含胶原酶、木瓜蛋白酶、透明质酸酶和胰酶的PBS液中，于37C酶解3、7、15、30d。另取两种半月板在PBS液37℃下水解30d。采用失重法、紫外光谱分析及扫描电镜测定其降解特性，并测定两种半月板的亲水性。结果两种半月板于4种酶中的酶解效果显著，其中以胰酶最明显，但去抗原半月板酶解程度低于新鲜半月板。新鲜半月板及去抗原半月板水解率分别为0．76％、0．81％。两种半月板在4种酶的降解液中紫外吸收值范围大致相同，为200～300nm。扫描电镜观察，去抗原半月板的空间结构改变不及新鲜半月板明显。去抗原半月板的亲水性较新鲜半月板稍低：吸水率为157％、188％；保水率为152％、167％。结论去抗原半月板降解较新鲜半月板慢，为调整去抗原半月板在体内降解速度提供依据。
- 李晓峰蔡道章王昆戎利民徐国风卢华定曾春史德海
- 关键词：半月板去抗原体外降解
- 壳聚糖在软骨组织工程中的应用被引量：15
- 2005年
- 目的对高分子生物材料壳聚糖在软骨组织工程中的应用现状进行综述。方法广泛查阅近年来有关壳聚糖在组织工程中应用的文献,综合分析,讨论其生物相容性、可降解性及其应用。结果壳聚糖具有良好的生物相容性、可降解性,除能提供细胞生长所需的三维支架作用外,还能提供类似软骨基质的细胞外环境,维持细胞表型及功能。结论壳聚糖在软骨组织工程中具有良好的应用前景。
- 曾春蔡道章全大萍
- 关键词：壳聚糖组织工程软骨
- 转化生长因子β1缓释载体诱导骨髓基质干细胞成软骨分化被引量：4
- 2008年
- 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)缓释对骨髓基质干细胞诱导成软骨分化的影响。方法乳化交联法制备TGF-β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合,将骨髓基质干细胞置于复合载体中立体培养,通过HE染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色、扫描电镜观察复合载体对细胞的增殖、分化及功能的影响。结果骨髓基质干细胞于复合载体中培养,细胞形态类似软骨细胞,并可见细胞增殖及细胞外基质分泌,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示基质中有Ⅱ型胶原表达,其细胞增殖率及Ⅱ型胶原分泌功能均较对照组明显增强。结论复合载体能够控制TGF-β1的释放并保持其活性,可促进骨髓基质干细胞的增殖并诱导其向软骨细胞分化。
- 曾春王昆蔡道章全大萍
- 关键词：微球体转化生长因子
