河北省科技厅科研项目(07276101D-68)
- 作品数：5 被引量：25H指数：4
- 相关作者：杨志宏田喜凤陈阳余源王卫亮更多>>
- 相关机构：唐山职业技术学院河北联合大学首都医科大学更多>>
- 发文基金：河北省科技厅科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双氢青蒿素与甲硝唑对体外蓝氏贾第鞭毛虫的损伤作用比较被引量：2
- 2012年
- 目的比较双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)和甲硝唑(metronidazole,TMZ)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)滋养体的损伤作用。方法改良TY1-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,待虫体达到对数生长期时(贴满瓶壁),弃去旧培养基,分别加入含DHA200μg/ml(LC_(50))和TMZ500μg/ml(LC_(50))的培养基继续培养,分别取药物作用后2、4、8、及12h样本,用光镜和电镜观察虫体的形态变化。结果光镜观察显示,用药后两组虫体均出现变形、肿胀,从培养管壁脱落、表面出现空泡;失去正常的"瓢形"运动,鞭毛摆动迟缓或停止。透射电镜观察显示,DHA作用2h后虫体肿胀、变形、内质网腔扩张;4h后肿大的滋养体内出现板层样结构,细胞核变形;8h后细胞质溶解行出现空泡,吸盘微管解体;12h后细胞膜崩解、脱落或表膜出现胞质突起,吸盘失去凹状结构并隆起变成空泡,大部分细胞质耗空,虫体死亡。甲硝唑作用2h,胞质致密度降低,4h虫体肿胀变圆,8h胞质内含物稀疏,致密度降低,空泡增多,核呈现锯齿状畸形,12h胞质内含物溶解破坏,进一步耗空,虫体死亡。结论双氢青蒿素与甲硝唑对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫均具有明显的杀伤作用,其损伤作用机制不同。
- 杨志宏聂姬锋田喜凤
- 关键词：双氢青蒿素甲硝唑蓝氏贾第鞭毛虫滋养体
- 蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的原核表达及纯化被引量：10
- 2011年
- 目的原核表达并纯化蓝氏贾第鞭毛虫的α-4贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-4贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-4,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-4,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在;SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约34 kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-4贾第素融合蛋白。结论成功克隆、表达并纯化了α-4贾第素蛋白,为α-4贾第素的细胞定位及功能研究提供了必要条件。
- 王洋余源王卫亮陈阳慈雅丽田喜凤郑佳杨志宏
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达
- 质谱技术鉴定体外蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架蛋白被引量：7
- 2010年
- 目的用质谱技术鉴定体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架蛋白。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,提取虫体总蛋白,Bradford法测定蛋白质含量,样品经蛋白质2D-电泳后用硝酸银染色,扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量,获取蛋白质点匹配信息,然后挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF-MS)分析,鉴定其种类。结果虫体总蛋白质含量(4.8241±8)μg/ml。蛋白质二维电泳显示,蛋白点密集,约1 253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高,蛋白点颜色深且清晰、明亮。在胶图中随机选取80个匹配良好的蛋白点,经质谱分析,鉴别出5类46种蛋白质,其中细胞骨架蛋白6种(14个点),即α-贾第素、β-贾第素、γ-贾第素、δ-贾第素、中体素、鞭毛蛋白-1,代谢酶或相关蛋白18种(28个点),翻译转录蛋白5种(5个点),其他蛋白3种(3个点)、未知蛋白14种(14个点)。另有6个点未测出。结论质谱分析技术可用于体外蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的鉴定。
- 何冰刘广伟曹蕾余源陈阳田喜凤杨志宏卢思奇赵永强
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫双向电泳质谱细胞骨架蛋白
- 双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体蛋白质的损伤被引量：8
- 2010年
- 目的探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)滋养体蛋白质的损伤作用。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体;设立实验组(DHA组)和正常对照组(C组)。实验组用含双氢青蒿素的培养基(含LC50=200μg/mL的DHA)培养;对照组培养基不含药物。提取各组虫体总蛋白,经Brad-ford法进行蛋白质定量,样本经2D-电泳和硝酸银染色后,扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量和种类,获取蛋白质点匹配信息,挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF MS)分析。结果经双氢青蒿素作用后虫体总蛋白质含量(0.6993μg/mL)明显低于对照组(4.8241μg/mL),二者差异有显著性(P<0.001)。蛋白质二维电泳凝胶图分析结果显示,正常对照组(C组)蛋白点密集,约1253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高(蛋白点颜色深且清晰、明亮);与此相反,实验组(DHA组)蛋白点显著减少,DHA作用6h后约617个点,作用12h后约326个点,蛋白表达量明显降低(蛋白点颜色浅,不清晰)。其次,正常对照组与双氢青蒿素组的12kDa^30kDa、等电点pI3.0~7.6范围内蛋白点表达量存在明显差异,即实验组该范围内大多数蛋白点完全消失,45kD^60kDa的蛋白点仅剩6个点。质谱分析鉴定结果显示,在正常对照组胶图所选的80个匹配良好的蛋白点中,鉴定出6种骨架蛋白(14个点),而实验组(DHA组)蛋白胶图中相对应的蛋白点消失。结论双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的蛋白质具有明显的损伤作用,其中包括细胞骨架蛋白。
- 余源陈阳王卫亮杨志宏田玉娜王玥田喜凤卢思奇赵永强
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫双向电泳质谱骨架蛋白
- 蓝氏贾第鞭毛虫α-7．1、α-11贾第素的原核表达及抗原活性鉴定被引量：8
- 2012年
- 目的原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-7.1和pET-28a(+)-α-11,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约43kD和35kD的位置分别出现目的蛋白条带,与理论值相符;通过相应α-7.1、α-11贾第素抗血清的Westernblot证实两种贾第素重组蛋白的抗原活性良好;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-7.1、α-11贾第素融合蛋白。结论成功地克隆、表达并纯化了具有良好抗原活性的α-7.1、α-11贾第素蛋白。
- 王洋杨志宏王沂曹蕾余源陈阳王卫亮慈雅丽田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达
