内蒙古自治区自然科学基金(2012MSll47)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 促红细胞生成素受体干扰RNA慢病毒表达载体的构建及干扰细胞的筛选被引量：2
- 2015年
- 目的构建人促红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒(LV)表达载体,并筛选出EPOR能稳定干扰人脑胶质细胞瘤U251细胞的最佳感染复数(MOI)。方法构建人EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,即LV-EPOR,收集病毒,检测病毒滴度后感染人脑胶质细胞瘤U251细胞(LV-EPOR-U251细胞),根据MOI值的不同分为MOI_(100)、MOI_(10)、MOI_1组,选出荧光表达量最高的一组,经RT-PCR检测m RNA表达,计算干扰效率。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。经RT-PCR检测结果证实,MOI_(100)组的LV-EPOR-U251细胞荧光表达量最高,其干扰效率为72%。结论成功构建LV-EPOR,LV-EPOR-U251细胞稳定干扰的MOI值为100。
- 呼格吉乐
- 关键词：干扰RNA促红细胞生成素受体慢病毒胶质瘤
- 新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体的构建
- 2014年
- 目的构建4个新靶点的人CyclinE干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达,获得干扰效果最好的真核表达载体,为CyclinE成为人脑肿瘤标志物提供有价值的资料。方法 (1)构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否;(2)用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株;(3)通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。结果 (1)成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。(2)CyclinEmRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。结论成功构建并筛选出效果最好的新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,使U251细胞的CyclinE mRNA表达明显降低。
- 渠志臻刘珊王艳艳高乃康呼格吉乐
- 关键词：干扰RNA新靶点细胞周期蛋白E胶质瘤
- 新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤侵袭能力的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化。方法构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定,转染载体到胶质瘤U251细胞株,将其分为U251组、PNC-U251组、PCyclinE-1-U251组、PCyclinE-2-U251组、PCyclinE-3-U251组、PCyclinE-4-U251组。通过RT-PCR的结果检测各组CyclinE mRNA的表达量,将干扰效果最好的一组用Transwell小室法检测侵袭能力的变化。结果成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4,而且CyclinE mRNA表达受到抑制,其中PCyclinE-1-U251组的穿膜细胞数为(45.4±2.7)个,U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数分别为(75.2±2.9)个和(74.4±3.5)个,U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较,差异无统计学意义(t=1.23,P=0.31),PCyclinE-1-U251组和U251组的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(t=15.00,P=0.00),PCyclinE-1-U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义(t=13.81,P=0.00)。结论本实验构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,PCyclinE-1-U251细胞侵袭能力减弱。
- 呼格吉乐高乃康韩艳秋
- 关键词：干扰RNA细胞周期蛋白E
