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基质金属蛋白酶9高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响被引量：4: 2012年; 目的观察基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9,MMP9）高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响，以阐述其在糖尿病足伤口愈合中的可能机制。方法本研究在中山大学孙逸仙纪念医院内分泌专科实验室完成。大鼠皮肤成纤维细胞与高糖（22mmol/L）＋高同型半胱氨酸（100μmol/L）联合孵育建立体外MMP9高表达细胞模型，另设正糖（5.5mm0l/L）孵育对照组。RealtimePCR、ELISA和明胶酶谱法检测MMP9mRNA、蛋白表达量及活性，流式细胞仪检测细胞增殖功能，CCK-8检测细胞活力，ELISA法检测细胞胶原（羟脯氨酸）分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Tmnswell法评价细胞纵向迁移能力。计量数据以均数±标准差（X^—±s）表示，两组间均数的比较采用成组t检验，以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果与对照组比较，MMP9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞的MMP9mRNA、蛋白表达量及活性，分别升高6.05倍、4.12倍和1.58倍（P〈0.01）;与此同时MMP9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例、增殖指数、细胞活力、胶原（羟脯氨酸）分泌量、6h横向迁移率和纵向迁移细胞数，分别下降29.8%、18.1%、23.3%、68.7%、45.0%和21.4%（P〈0.01）。结论MMP9高表达的皮肤成纤维细胞增殖减慢、活力下降、迁移和胶原分泌能力降低，提示MMP9可能抑制成纤维细胞的生物学行为。; 薛声能杨川林刁珠严励雷娟; 关键词：基质金属蛋白酶9 成纤维细胞生物学行为细胞活力糖尿病足

外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1对基质金属蛋白酶-9高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响被引量：1: 2012年; 目的观察外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）对基质金属蛋白酶-9（MMP-9）高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响，为寻找治疗糖尿病足的新方法提供实验依据。方法应用sD大鼠皮肤成纤维细胞株CRL-1213用高糖（22mmol／L）＋高同型半胱氨酸（100μmol／L）联合培养建立体外MMP-9高表达皮肤成纤维细胞模型，用外源性TIMP-1（100μg／iJ）抑制MMP-9的活性，采用实时PCR法和ELISA法检测MMP．9基因及蛋白表达量，用明胶酶谱法检测MMP-9蛋白活性，采用流式细胞术检测细胞增殖功能、CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测细胞胶原（羟脯氨酸）分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力。采用单因素方差分析进行统计学分析。结果TIMP-1干预组大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达量与MMP-9高表达组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但MMP-9蛋白活性受到明显抑制（1．47±0．13VS0．434-0．13，t=12．495，P〈0．01）。与对照组比较，MMP-9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[（9．31±0．24）％VS（6．54±0．29）％]、增殖指数[（13．8±0．5）％VS（11．3±0．6）％]、细胞活力（1．76±0．13V81．35±0．12）、胶原（羟脯氨酸）分泌量[（1126-1-63）vs（353±61）μg／L]、6h横向迁移率[（38．7±2．6）％VS（21．3±2．1）％]和纵向迁移细胞数（91±4vs71±4）均明显减少（t=16．433、7．328、5．113、19．847、11．529、8．124，均P〈0．05）；TIMP-1干预后，大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[（6．54±0．29）％VS（7．75±0．27）％]、增殖指数[（11．3±0．6）％vs（12．5±0．5）％]、细胞活力（1．35±0．12VS1．64±0．14）、胶原（羟脯氨酸）分泌量[（3534-61）vs（829±59）仙g／L]、6h横向迁移率[（21．3±2．1）％VS（31．5±2．7）％]和纵向迁移细胞数（71±4vs85±4）与MMP; 薛声能雷娟杨川林刁珠朱平徐明彤严励; 关键词：基质金属蛋白酶9 组织金属蛋白酶抑制剂1

高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型的建立被引量：2: 2011年; 目的:建立高分泌基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的皮肤成纤维细胞模型,为探讨MMP9在糖尿病足伤口愈合中的作用提供细胞模型。方法:用不同浓度的糖和同型半胱氨酸培养皮肤成纤维细胞,检测各组细胞MMP9 mRNA及蛋白表达水平和活性,筛选出MMP9表达量最高的组。结果:(1)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9mRNA表达量(7.05±1.02)显著高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(2)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白表达量(206.9±33.6)pg/ml明显高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(3)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白活性(1.47±0.13)高于正糖组和高糖组(P均<0.01)。结论:高糖+高同型半胱氨酸联合培养成功建立体外高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型。; 薛声能雷娟林刁珠朱平严励; 关键词：基质金属蛋白酶-9 成纤维细胞糖尿病

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广东省科技计划工业攻关项目(2008A030201012)

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