江苏省自然科学基金(BK2010018)
- 作品数：10 被引量：71H指数：4
- 相关作者：周益军范永坚熊如意程兆榜徐秋芳更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学福建农林大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 南方水稻黑条矮缩病毒SP7-1植物表达载体的构建及遗传转化被引量：1
- 2012年
- 克隆南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的SP7-1基因,构建植物表达载体并转化拟南芥,为研究SP7-1致病机理提供基础。根据已发表的SRBSDV SP7-1序列,设计特异性引物,通过RT-PCR的方法从感病水稻植株中克隆到完整的SP7-1基因。通过酶切连接,构建了SP7-1植物表达载体pCHF3/SP7-1,通过农杆菌介导的花序浸润法转化野生型拟南芥,获得转化植株T0代种子。对收获的T0代种子进行卡那霉素筛选,获得了4株阳性植株。阳性植株的PCR和RT-PCR分析检测结果表明,构建的SP7-1载体已成功转化拟南芥,病毒SP7-1已经整合至拟南芥基因组中并能正常表达。
- 苑侠孙枫卢嫣红周彤范永坚周益军
- 关键词：南方水稻黑条矮缩病毒拟南芥
- 中国水稻条纹叶枯病研究进展被引量：23
- 2012年
- 水稻条纹叶枯病是水稻重要的病毒病害,对水稻生产造成了极大损失。该病是由灰飞虱(LaodelphaxStriatellus Fallén)传播水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的。该文综述了近年来国内外有关水稻条纹病毒的基因组结构、功能、复制、表达调控、分子变异、病毒与介体互作、抗病育种、预测预报和防治等方面的最新研究进展,并进行了讨论和展望。
- 周益军李硕程兆榜周彤范永坚
- 关键词：水稻条纹病毒
- 灰飞虱高带毒(RSV)群体酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：9
- 2011年
- 为了研究灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén与水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)互作机制,本研究构建了灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库。以实验室筛选的灰飞虱高带毒群体为材料,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,并连接三框型接头,层析柱分级纯化。采用同源重组反应制备三框型cDNA入门文库,再通过同源重组将入门文库转移到Gateway兼容载体pGADT7-DEST上,构建获得酵母双杂交cDNA文库。检测结果表明:文库库容量为3.68×107cfu,扩增文库滴度为2.62×1010cfu/mL;文库重组率大于95%,cDNA插入片段平均长度>1kb,达到了标准cDNA文库的要求。灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库的构建为开展昆虫介体与水稻条纹病毒互作机制的研究奠定了基础。
- 李硕孙丽娟李醒熊如意徐秋芳周益军
- 关键词：灰飞虱水稻条纹病毒同源重组CDNA文库
- 灰飞虱来源的水稻条纹病毒病害特异性蛋白基因遗传多样性被引量：8
- 2010年
- 对来自江苏、云南、山东、河北等地灰飞虱来源的21个水稻条纹病毒分离物的病害特异性蛋白（sp）基因进行了遗传多样性分析研究.序列测定表明,所有分离物的sp基因大小相同,均由537个核苷酸组成,编码178个氨基酸和1个终止密码子.采用DNAStar软件进行分析,21个RSV分离物核苷酸和推导的编码蛋白氨基酸序列同源性分别为96.1%～100%和95.5%～100%.与已报道水稻来源的27个RSV分离物一起进行序列同源性比较和系统进化树分析,结果表明,RSV-sp基因核苷酸序列变异相对较大,除灰飞虱来源的或者云南来源的分离物相对独立成组外无明显的规律性.从功能上分析,其遗传多样性首先与寄主相关,从寄主角度可以划分为灰飞虱和水稻两个寄主群;其次与地缘相关,在灰飞虱寄主群中可以分成中国云南及云南以外的两个地理亚群,在水稻寄主群中可以划分为中国云南和云南以外的多个地理亚群.
- 任春梅程兆榜季英华熊如意范永坚周益军
- 关键词：水稻条纹病毒
- 南方水稻黑条矮缩病毒S6编码一个沉默抑制子被引量：27
- 2011年
- 【目的】分析南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)基因组S6编码的SP6蛋白的抑制子活性,明确SRBSDV是否编码RNA沉默抑制子来干扰植物的沉默。【方法】将分别含有SP6与GFP质粒的农杆菌共浸润转GFP基因的16c本氏烟纯合系,观察SP6对局部沉默和系统沉默的抑制作用;将含有SP6,GFP和dsGFP质粒的农杆菌三者共浸润,观察SP6对由dsRNA引起的沉默的抑制作用;在同一植株不同部位接种GFP和SP6,观察SP6对RNA沉默信号传导的影响;通过马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)在本氏烟上表达SP6,观察SP6是否能增强PVX的致病性。【结果】SP6能抑制由GFP正义RNA介导的沉默,但其抑制作用较弱,仅能延缓局部沉默和系统沉默的产生。SP6能灭活RNA沉默信号,阻止沉默信号的长距离传导,回复GFP的沉默,但不能抑制由dsRNA引起的沉默。利用PVX在本氏烟上表达SP6能增强PVX的致病性。【结论】SP6是病毒编码的RNA沉默抑制子,在RNA沉默的起始和信号传导阶段起作用。
- 卢嫣红张金凤熊如意徐秋芳周益军
- 关键词：南方水稻黑条矮缩病毒基因沉默抑制子
- 江苏省水稻矮缩病的病原鉴定被引量：1
- 2012年
- 根据已发布的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)S7片段的序列分别设计特异性引物RB-S7-F/R和SRB-S7-F/R,采用RT-PCR、序列测定和同源性比对的方法,对2009年江苏发生的水稻矮缩病的病原进行了鉴定。结果表明,用RB-S7-F/R引物在47份检测样品中有36份可以扩增到一条1 200 bp左右的目的片段,而用SRB-S7-F/R引物未能扩增到预期条带。序列测定结果表明,扩增片段与已经发表的RBSDV中国分离物相应片段的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3%～100%和97.4%～100%,与SRBSDV相应片段的核苷酸和氨基酸同源性为77.4%～79.5%。系统进化分析得到类似结果。上述研究表明,2009年引起江苏水稻矮缩病症的病原为RBSDV,尚未发现SRBSDV的危害。
- 高瑞珍程兆榜杨荣明朱凤季英华任春梅吴丽莉周益军范永坚
- 关键词：灰飞虱白背飞虱南方水稻黑条矮缩病毒
- 水稻条纹病毒胁迫对灰飞虱mucin基因表达量的影响被引量：3
- 2011年
- 为分析灰飞虱mucin基因在水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)侵染过程中的作用,采用荧光定量PCR的方法分析了RSV胁迫条件下灰飞虱mucin基因mRNA表达量的变化。饲喂RSV病叶1天和2天时灰飞虱mucin基因的表达量没有明显变化,而在3天和7天时灰飞虱mucin基因的表达量增加了3.60倍和1.97倍。饲喂健康水稻叶片1、2、3和7天后,灰飞虱mucin基因的表达量分别为饲喂前的1.07、1.12、0.78和0.34倍,而饲喂病叶1、2、3和7天后,mucin基因的表达量分别为饲喂前的1.15、1.19、3.19和1.01倍。结果表明,病毒胁迫使灰飞虱体内mucin基因的表达量增加,暗示mucin基因在RSV与灰飞虱互作过程中起着重要作用。
- 徐秋芳乐文静张金凤熊如意周益军
- 关键词：灰飞虱实时荧光定量PCR
- 水稻条纹病毒外壳蛋白叶绿体离体跨膜运输研究
- 2011年
- 【目的】明确离体条件下水稻条纹病毒(RSV)外壳蛋白(CP)能否进入叶绿体,为研究RSV的致病机理提供依据和方法。【方法】参考有关文献的方法提取获得水稻和小麦叶绿体,在离体条件下进行RSV-CP的叶绿体跨膜运输试验,同时研究孵育时间、病毒浓度等对RSV-CP在水稻叶绿体中离体跨膜运输的影响。【结果】在离体条件下5min,RSV-CP即可进入RSV寄主植物水稻、小麦的叶绿体内,其离体跨膜运输的基本条件为RSV浓度58.1μg/mL、孵育时间15min。随着孵育时间的延长,进入叶绿体中的CP量有所增加;反应体系中RSV浓度加大,进入叶绿体中的RSV-CP量随之增加。【结论】离体条件下RSV-CP可进入寄主植物水稻、小麦的叶绿体中,病毒外壳蛋白进入叶绿体可能是其诱发花叶症状的主要原因之一。
- 程兆榜於春任春梅周益军范永坚谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒外壳蛋白叶绿体跨膜运输
- 灰飞虱来源的水稻条纹病毒外壳蛋白基因遗传多样性被引量：3
- 2012年
- 采用单雌产卵法获得来自江苏、云南、山东、河北等地灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallén,SBPH)来源的21个水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)分离物,提取灰飞虱总RNA,经RT-PCR扩增,获得21个RSV分离物的包含外壳蛋白(cp)基因在内的约1 000 bp左右的DNA片段。测序结果显示,参试分离物的cp由969个核苷酸组成,编码322个氨基酸。采用DNASTAR软件进行分析,21个灰飞虱来源的RSV-cp核苷酸序列和推导出的编码蛋白的氨基酸序列同源性分别为95.7%～100%和96.0%～100%。与已报道水稻来源的32个RSV分离物一起进行序列同源性比较和系统进化树分析结果表明,总体而言RSV-cp较为保守,其遗传多样性首先与地缘相关,从地理位置上可以分成中国云南、中国沿海和日本3个地理种群;其次与寄主相关,在同一地理种群中可以划分为灰飞虱和水稻2个寄主种群。
- 程兆榜任春梅周益军季英华范永坚谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒外壳蛋白基因灰飞虱地理种群
- 灰飞虱mucin-like基因全长cDNA的克隆及序列分析
- 2011年
- 昆虫肠黏蛋白(Insect intestinal mucin)是围食膜的重要组成部分,具有保护昆虫消化道免受病原物侵染的作用,同时也是昆虫生物防治的潜在靶标。获取灰飞虱肠黏蛋白基因对研究其基因功能及开发灰飞虱生物防治新靶标具有重要意义。该研究根据灰飞虱mucin-like基因片段(GenBank登录号:AY578090)设计特异性引物,采用RACE方法克隆获取了灰飞虱mucin-like基因cDNA全长序列(GenBank登录号为JF502033)。核酸序列分析显示:该基因全长2 315 bp,开放阅读框为2 175 bp,编码725个氨基酸,在po1y(A)末端上游有1个典型的多聚腺苷酸信号序列AATAAA。根据cDNA序列推导的氨基酸序列分析结果表明,该序列具有5'端信号肽,但不含有O联糖基化位点和几丁质结合域。序列比对表明该基因与其他昆虫的肠黏蛋白基因没有明显的同源性,推测其是一种新的昆虫肠黏蛋白基因。
- 徐秋芳张金凤乐文静张晓霞熊如意周益军
- 关键词：灰飞虱
