广州市医药卫生科技项目(2008-YB-012)
- 作品数：11 被引量：41H指数：5
- 相关作者：肖慧丁宁佘守章许立新高巨更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院广州中医药大学广东省中医院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1表达的影响被引量：9
- 2009年
- 目的评价不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达的影响。方法雄性SD大鼠，周龄8～12周，体重270～320g，放血处死后，收集支气管肺泡灌洗液，分离、培养和传代肺泡巨噬细胞。将细胞接种于6孔培养板中，细胞浓度10^5／ml，培养48h后，随机分为5组（11=6），对照组（C组）不施加机械牵张应力；S1-4组分别施加5％、10％、15％和20％机械牵张应力，牵张频率30次／min，牵张时间24h。采用RT-PCR法测定HMGB1 mRNA表达；采用Westemblot方法测定HMGB1表达。结果肺泡巨噬细胞给予机械牵张应力后，HMGB1及其mRNA表达随机械牵张应力的增大而上调（P〈0．05或0．01）。结论大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1的表达与机械牵张应力呈强度依赖性。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：HMGB1蛋白
- p38信号通路参与呼吸机所致肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达被引量：5
- 2009年
- 目的 研究p38信号通路在呼吸机所致肺损伤（ventilator-induced lung injury，VILI）大鼠肺组织表达高迁移率族蛋白B1（highmobility group box 1 protein，HMGB1）中的作用。方法健康SD大鼠24只随机分为3组：对照组（A组）不行机械通气，保留自主呼吸；常规通气组（B组）潮气量（Vt）为8mL／kg；大潮气量通气组（C组）Vt为40mL／kg。机械通气4h后处死动物，测定支气管肺泡灌洗液中总蛋白水平、白细胞计数以及肺湿干重比值（W／D）和中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）活性。采用Western blot方法检测肺组织HMGB1蛋白和D38激酶活性变化，采用RT-PCR方法检测HMGB1 mRNA的表达。应用单因素方差分析进行不同组别间的比较。结果通气4h后，与A组相比，C组总蛋白水平（1．77±0．68）g／L、白细胞计数（106．55±28．17）×10^7L^-1、肺W／D比值（7．16±1．02）、MPO活性（3．94±1．21）U／g、HMGB1蛋白（0．64±0．17）和mRNA（1．17±0．45）表达以及p38激酶活性（0．514-0．12）均明显增加（P〈0．05），而B组上述各项指标的变化均无统计学意义（P〉0．05）。结论大潮气量机械通气可引起大鼠急性肺损伤，p38参与了机械牵张诱导肺组织HMGB1的表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：机械通气急性肺损伤高迁移率族蛋白B1P38丝裂原活化蛋白激酶
- 机械牵张诱导肺泡巨噬细胞的细胞因子表达谱及其与脂多糖对MIP-2释放的协同效应被引量：9
- 2009年
- 目的观察机械牵张诱导肺泡巨噬细胞（AM）的细胞因子表达谱，以及机械牵张对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）表达的影响。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测机械牵张诱导AM15种细胞因子的水平变化；检测不同强度机械牵张（5％、10％、15％和20％）和牵张刺激（20％）后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）AM分泌MIP-2的水平，以及机械牵张（20％）与LPS（10ng／mL）共同刺激对AM分泌MIP-2的影响。结果牵张刺激后AM分泌IL-1β、IL-6、MIP-2、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、IFN-γ和干扰素诱导蛋白10（IP-10）的水平明显升高（P均〈0．001）。机械牵张以强度和时间依赖方式诱导MIP-2的分泌，随着牵张强度的增加（10％、15％和20％），MIP-2的分泌水平也明显增加（P均〈0．001）；在刺激后6～24h范围内MIP-2水平持续升高（P〈0．001）。以机械牵张和LPS共同刺激AM，MIP-2的生成量大大增加，二者存在协同效应（F=121．983，P〈0．001）。结论机械牵张可诱导AM释放多种细胞因子，机械牵张诱导MIP-2的上调具有强度和时间依赖性，并协同LPS诱导AM释放MIP-2，可能在呼吸机所致肺损伤的发生和发展中起重要作用。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：机械牵张肺泡巨噬细胞细胞因子呼吸机所致肺损伤
- 羟乙基淀粉130/0.4对大鼠内毒素性急性肺损伤ICAM-1表达的影响及MAPK信号通路在其中的作用被引量：16
- 2009年
- 目的探讨不同剂量羟乙基淀粉溶液(hydroxyethylstarch,HES)130.04对大鼠内毒素性急性肺损伤(acute lunginjury,ALI)肺组织细胞间粘附分子1(intercellular adhesionmolecule1,ICAM-1)表达的影响及丝裂原活化蛋白激酶(mi-togen activated protein kinase,MAPK)通路在其中的作用。方法36只♂SD大鼠,随机分为6组,每组6只,N组(对照组)不给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),H1、H2、H3、H4组给予LPS后分别按照3.75,7.5,15,30ml.kg-1的剂量持续输入HES130/0.4,L组给予LPS后持续输入生理盐水。于LPS注射4h后处死大鼠,测定肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性、肺湿干重比(W/D)、ICAM-1蛋白和mRNA表达、MAPK激酶活性以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白和白细胞数。结果与N组比较,L组肺组织MPO活性、W/D比、ICAM-1蛋白和mRNA、p-ERK、p-p38、p-JNK表达以及BALF中总蛋白和白细胞数升高;与L组比较,H1和H2组肺组织和BALF中上述指标降低,其中以7.5ml.kg-1剂量最为明显。结论中小剂量使用HES130/0.4可改善内毒素性急性肺损伤炎症反应,这种作用可能与通过MAPK通路抑制ICAM-1蛋白和mRNA的表达有关。
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：羟乙基淀粉内毒素急性肺损伤细胞间粘附分子-1
- 人高迁移率族蛋白B1原核表达及其高亲和噬菌体融合肽的筛选
- 2010年
- 目的 构建谷胱甘肽巯基转移酶（GST）标记的人高迁移率族蛋白B1（HMGB1）融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达.应用噬菌体展示技术筛选HMGB1的高亲和肽.方法 用RT-PCR方法扩增HMGB1 cDNA,构建于原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠杆菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导GST-HMGB1蛋白表达;Ni^2＋-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化重组HMGB1蛋白.以重组HMGB1蛋白为靶分子,进行4轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第4轮洗脱物中随机挑选20个单克隆噬菌体扩增后进行ELISA鉴定,用酶标仪测定450 nm处的吸光度值.对获得的阳性单克隆噬菌体分别进行扩增、纯化,并对DNA测序,以确定插入七肽的氨基酸序列.结果 RT-PCR扩增HMGB1 cDNA大小约648 bp,成功构建了pGEX4T-1-HMGB1重组质粒并纯化了HMGB1蛋白,其相对分子质量为65000.经过4轮筛选后,噬菌体富集了74倍（第4轮与第1轮回收量分别为5.2×10^8、7.0×10^6 pfu）,随机挑取的20个噬菌体克隆中9个可与HMGB1结合,测序发现其中的6个序列一致,均为DYFVSSV.结论 筛选到1个可与HMGB1高亲和结合的噬菌体展示七肽,其对HMGB1活性的拮抗效应有待进一步阐明.
- 丁宁肖慧许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白质类细菌噬菌体肽库谷胱甘肽转移酶
- 限制性输液对失血性休克大鼠血流动力学的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨限制性输液对失血性休克大鼠血流动力学的影响。方法制作大鼠失血性休克模型,采取限制性输液和大量输液两种不同输液方法复苏大鼠失血性休克,对比各组不同时间点的血流动力学变化,记录出血量、输液量并计算生存率。结果休克模型120 min后,与大量输液组比较,限制性输液组的呼吸、心率降低,有统计学意义,平均动脉压和中心静脉压明显升高(P<0.05);休克急救期,限制性输液组失血量少于大量输液组(P<0.05),输液量明显低于大量输液组(P<0.05);休克后24 h和72 h生存率比较,限制性输液组高于大量输液组(P<0.05)。结论限制性输液能明显改善失血性休克大鼠的血流动力学,减少失血量以及输液量,提高生存率,是复苏失血性休克的理想方法。
- 肖慧丁宁刘灵芝佘守章
- 关键词：限制性输液血流动力学失血性休克
- 晚期糖基化终产物受体胞外段的原核表达及其相互作用蛋白的筛选被引量：2
- 2009年
- 目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定。以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定。对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索Gen-Bank中的同源序列。结果成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白。经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合。对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白。结论应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：糖基化终产物受体噬菌体展示肽库
- 高迁移率族蛋白B1的表达纯化及其对单核细胞释放炎症因子的影响被引量：2
- 2009年
- 目的通过重组HMGB1蛋白，观察其对单核细胞株THP—1释放炎症因子的影响。方法用RT—PCR方法扩增人HMGB1 cDNA，将目的片段HMGB1亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠杆菌BL21，以IPTG诱导HMGB1融合蛋白表达，经Ni^2 -NTA和多黏菌素B亲和层析柱纯化蛋白。分别用不同浓度的重组HMGB1蛋白（10、50和100ng,／mL）刺激THP-1细胞24h，应用Liquichip液相蛋白芯片系统检测培养上清中TNF—α、IL—1、IL-6和IL-8的浓度；以终浓度为100ng／mL的HMGB1蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6、12和24h，检测上述细胞因子的浓度。结果成功表达、纯化了重组HMGB1蛋白，与对照组相比，浓度为10、50和100．g／mL的HMGB1蛋白均使TNF—α、IL-1、IL-6和IL-8的分泌增加（尸均〈0．05）。并且随着HMGB1蛋白剂量的增加呈递增趋势；上述细胞因子水平在以100ng／mL的HMGB1刺激后3h或6h即开始升高（P均〈0．05），并且均随刺激时间的延长而呈递增趋势。结论HMGB1可诱导一系列细胞因子的产生和释放，为临床防治脓毒症提供了一个新的靶点。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：高迁移率族蛋白B1单核细胞脓毒症炎症因子
- p38MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞表达HMGB1中的作用被引量：5
- 2009年
- 目的:研究p38 MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞(AM)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法:大鼠AM随机分为A、B、C3组,A组为对照组;B组细胞施加20%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,在牵张前用p38 MAPK特异性抑制剂SB203580(40μmol/L)预处理2h。利用RT-PCR法检测HMGB1 mRNA的表达,Western blotting检测HMGB1蛋白表达和p38 MAPK的活性。结果:与对照组相比,AM施加20%牵张应变可诱导HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加、p38 MAPK活性明显增高(均P<0.05),SB203580可显著抑制牵张应变的这种诱导作用(均P<0.05)。结论:周期性机械牵张可能通过p38 MAPK信号通路,调节肺泡巨噬细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：机械牵张P38MAP激酶肺泡巨噬细胞
- 细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK激酶的活性。结果A549细胞施加14%牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P<0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断。结论机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。
- 丁宁肖慧高巨许立新佘守章
- 关键词：机械牵张高迁移率族蛋白B1细胞外调节蛋白激酶免疫组织化学免疫印迹法肺泡上皮细胞
