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江苏省宜兴地区丙型肝炎病毒F蛋白抗体检测被引量：4: 2007年; 目的检测江苏省宜兴地区丙型肝炎(丙肝)患者血清丙肝病毒(HCV)-F抗体及其分布。方法利用基因重组获得的HCV-F/GST蛋白作为抗原,包被酶联反应板,ELISA间接法检测120例丙肝患者、15例乙肝患者、3例戊肝患者及10份正常人血清HCV-F抗体,结合丙肝患者的临床资料及疾病特征,统计分析HCV-F抗体的分布情况及与HCV感染的关系。结果120例丙肝患者血清HCV-F抗体阳性82例,阳性率68%,而15例乙肝、3例戊肝患者及10份正常人血清标本均未检出阳性;资料分析显示HCV-F抗体阳性率与HCV患者年龄、临床类型之间差异有统计学意义,51岁以上年龄组的HCV-F抗体阳性率是20～50岁组的6.675倍(95%CI:2.407～19.071),并且随着病程进展,阳性率也随之增高(OR=2.749,95%CI:1.470～5.141)。结论江苏省宜兴地区HCV感染者血清中存在HCV-F抗体,并可能与病程相关。; 邓小昭蒋春梅许可王忠灿丁伟良喻荣彬王洁吴超张云; 关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白

江苏省宜兴地区丙型肝炎病毒基因分型研究被引量：15: 2005年; 目的了解江苏省宜兴地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特征和病毒变异情况。方法对宜兴市人民医院收治的158例HCV抗体阳性患者血清进行HCV RNA检测,对阳性标本进行Simmonds分型,采用5′非编码区(5′NCR)1、2、3、1b型特异性引物进行PCR扩增,并对1b型和2 型各1株的PCR产物测序验证。分析不同性别、临床类型的丙型肝炎患者基因型分布差异。结果158份血清中,有95份为HCV RNA阳性,其中1b型80份(84.2%),2型5份(5.3%),1b/2型的混合感染5份(5.3%),不能分型的5份(5.3%),1b型的序列与GenBank J-4株的同源性为99.2%,2型与GenBank J-6株的同源性为97.7%。男性和女性在基因型总体分布上存在差异(P<0.05),并且在单一型感染和混合型感染的分布上差异亦有统计学意义,不同临床类型的丙型肝炎中HCV基因型分布未显示差异。结论江苏省宜兴地区HCV以1b型为主,男女患者HCV基因型分布差异有统计学意义,而不同临床类型的HCV基因型分布无显著差异,基本反映了本地区HCV感染的特点。; 许可邓小昭丁伟良高键喻荣彬刁振宇谈永飞张云; 关键词：丙型肝炎病毒基因分型

丙肝病毒F蛋白的研究进展: 2006年; 蒋春梅张云; 关键词：F蛋白丙肝病毒丙型肝炎病毒不同基因型 HCV 自然感染

丙肝病毒E2包膜糖蛋白研究进展被引量：1: 2005年; 许可张云; 关键词：丙型肝炎病毒基因编码

苏南地区1b型丙型肝炎病毒包膜区变异进化研究被引量：2: 2006年; 本研究旨在了解本地区丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)基因型构成的前提下,分析1b型丙型肝炎病毒包膜2(second envelope glycoprotein E2)区的变异和种系进化,并研究其准种变异与临床肝病活动度的关系。对宜兴市人民医院收集的抗HCV抗体阳性患者166名,RT-PCR方法检测HCVRNA,HCVRNA阳性患者采用型特异性引物分型法确定病毒基因型;选择其中未经干扰素治疗的43例1b型慢性丙型肝炎患者的血清标本,扩增E2区,从中选取肝硬化患者4例,慢性非肝硬化患者6例的E2区PCR产物纯化测序,序列采用CLUSTALW与GENBANK上多株不同型别的HCV序列进行比对分析,结果采用Phylip软件构建遗传进化树;并观察E2区高变区1(HVR-1)的氨基酸(aminoacid,aa)残基序列的变异特征;采用单链构象多态性垂直电泳检测43例患者个体内HCVE2区准种的变异情况,比较不同肝病活动度患者准种变异情况。结果表明本地区HCV以1b型为主(84.3%),对E2区基因序列和氨基酸序列变异的分析显示其变异具有一定的规律性,种系进化树提示本地区HCV病毒序列与上海、湖南、日本等地的HCV株有较近的亲缘性。43例患者中ALT高于正常的丙型肝炎患者准种复杂程度明显高于ALT正常者(P<0.05)。故本地区HCV基因变异符合中国东南部的特点,基因变异与临床肝病活动度具有相关性。; 许可蒋春梅邓小昭丁伟良谈永飞张云; 关键词：丙型肝炎病毒进化树准种丙氨酸转氨酶

南京地区吸毒人群丙型肝炎的常见基因型分型研究被引量：7: 2009年; 目的了解南京地区吸毒人群丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)常见基因型分布特点。方法对南京市强制戒毒所收集提供的198份抗-HCV阳性吸毒人员血清进行HCV RNA检测,对阳性标本按照Simmonds分型方法,采用5′非编码区(5′NCR)1、2、3、1b型特异性引物进行PCR扩增与分型,同时分析不同类型吸毒人员丙型肝炎感染者上述基因型分布差异。结果198份血清中,有168份为HCV RNA阳性。单一基因型占77.4%,其中1b亚型106份(63.1%),2型15份(8.9%),3型9份(5.4%);混合基因型占20.2%,其中1b/2型25份(14.8%),1b/3型5份(3.0%),2/3型4份(2.4%);未确定基因型4份(2.4%)。静脉和非静脉吸毒人群HCV基因型分布差异无统计学意义(χ2=3.614,P>0.05),单一基因型和混合基因型分布差异亦无统计学意义(χ2=0.018,P>0.05)。结论南京地区吸毒人群HCV基因型1b型为主,其他多种基因型并存,总体分布特点介于中国南北方之间。; 龚建明杨静静王昊鹏喻荣彬邓小昭张云; 关键词：丙型肝炎病毒基因型吸毒

丙型肝炎病毒F蛋白的原核表达及初步应用被引量：10: 2007年; 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清。方法提取患者血清中的HCVRNA,并进行基因分型。取鉴定为HCV1b型的病毒,用RT-PCR扩增HCVF蛋白基因的序列。将扩增产物插入pGEM-T载体中,测序正确后,用EcoRI、BamHI双酶切后,再插入表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌TG1,在IPTG诱导下表达GST-F蛋白。用亲和层析法纯化GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清。并用纯化的GST-F蛋白进行ELISA法检测丙肝患者血清抗F蛋白抗体。结果在细菌裂解液中检测到重组的融合蛋白,经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-F融合蛋白。应用Westernblot方法检测证实,用纯化的GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠得到了特异性的抗体。用纯化的GST-F蛋白进行ELISA检测120例丙肝患者血清抗F蛋白抗体,82例呈阳性。结论通过上述方法制备的融合蛋白纯度较高,免疫小鼠获得的抗体具有良好的特异性。用纯化的目的蛋白检测丙肝患者血清抗F蛋白的抗体的阳性率为68%,与国外的报道接近,说明在HCV感染的自然病程中有F蛋白的产生,为研究HCVF蛋白及与HCV相关疾病的诊断和治疗提供了条件。; 蒋春梅刁振宇崔国兴钱万红邓小昭许可丁伟良谈永飞张云; 关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白蛋白表达抗体制备

丙型肝炎病毒基因1b型F蛋白对人肝细胞癌细胞株HepG2凋亡的影响被引量：1: 2009年; 目的研究丙型肝炎病毒（HCV）基因1b型F蛋白对人肝细胞癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法构建真核表达重组质粒pcDNA3．0-F—EGFP，并利用Lipofectamine2000转染人肝细胞癌细胞系HepG2，同时设pcDNA3．0-C-EGFP-HepG2阳性对照、pcDNA3．0-HepG2为阴性对照及未转染HepG2为空白对照，以Act-D、TNFα诱导四组细胞系发生凋亡，Annexin V-FITC／PI双染检测肿瘤细胞凋广率，并使用细胞凋亡DNA Ladder检测，进一步验证HCV 1b型F蛋白在肝细胞凋亡的生物学功能效应。结果pcDNA3．0-F-EGFP-HepG2细胞系在发生凋亡的时间上比pcDNA3．0-C-EGFP-HepG2快，但相对空白质粒转染组及未转染HepG2细胞系有明显延迟，凋亡的发生率也明显低于阴性对照及空白对照细胞系（P〈0．001）。结论外源性基因HCV1b型F的引入及表达，对HepG2细胞的凋亡有抑制作用。; 杨静静张云邓小昭许可王忠灿王洁冯乐丁伟良; 关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白凋亡肿瘤坏死因子Α

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江苏省高校自然科学研究项目(03KJD330144)

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