广西教育厅科研项目(200911LX38)
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二烯丙基硫醚对微囊藻毒素LR致细胞毒性及DNA损伤的影响
- 2011年
- 目的研究大蒜主要活性成分之一的二烯丙基硫醚(diallyl sulfide,DAS)对微囊藻毒素LR(MCLR)诱导的细胞毒性和氧化性DNA损伤的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HT17,用1μmol/L MCLR染毒的同时给予DAS(0.02～2 mmol/L)作用24 h,同时设立未处理对照组、单纯MCLR染毒组和单纯DAS处理组。测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率来反映细胞毒性,并应用免疫酶染色法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平。结果单纯MCLR染毒组的LDH漏出率和8-OHdG染色强度明显高于未处理对照组。0.2 mmol/L以上的DAS与MCLR联合处理细胞时,LDH漏出率和8-OHdG染色强度明显低于单纯MCLR染毒组。结论 DAS可能对MCLR诱导的细胞毒性和氧化性DNA损伤具有保护作用。
- 农清清Toru TakeuchiKimiko Izumo张志勇何敏
- 关键词：微囊藻毒素LR细胞毒性氧化性DNA损伤
- 微囊藻毒素-LR对人肝癌HT17细胞周期及细胞凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HT17细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法调整HT17细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、2.0、5.0μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)染毒组以及MC-LR(0.8μmol/L)+DFO(1 mmol/L)染毒组培养24 h,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况。调整HT17细胞密度为1×105/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照)、MC-LR(0.8μmol/L)染毒组和DFO(1 mmol/L)染毒组以及DFO(1 mmol/L)+MC-LR(0.8μmol/L)染毒组培养24、48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果高剂量(≥0.8μmol/L)MC-LR染毒24 h后细胞存活率明显低于溶剂对照组(P<0.01),DFO+MC-LR染毒组细胞存活率高于0.8μmol/L MC-LR染毒组(P<0.05)。与溶剂对照组相比,MC-LR染毒24、48 h后G0/G1期细胞所占比例和细胞凋亡率均增高,S期细胞所占比例下降(P<0.05或P<0.01);DFO+MC-LR染毒组与MC-LR染毒组染毒24 h后各期细胞所占比例无差异(P>0.05)。DFO+MC-LR染毒组染毒24 h后细胞凋亡率低于MC-LR染毒组(P<0.01)。结论 MC-LR可导致HT17细胞在G0/G1期发生阻滞及细胞凋亡,可能与其诱发的氧化应激、蛋白质磷酸化状态紊乱有关。
- 农清清Takeuchi TKomatsu M张志勇何敏
- 关键词：微囊藻毒素-LR细胞周期细胞凋亡
- 微囊藻毒素-LR对人肝癌HepG2细胞活性氧生成和脂质过氧化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察非细胞毒性剂量的微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HepG2细胞活性氧(ROS)生成和脂质过氧化的影响。方法调整HepG2细胞的密度为1×104/孔,分别加入终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、3、10、30、100μmol/L的MC-LR溶液染毒4、24 h。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性。调整人肝癌HepG2细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、3、10、30μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)处理组以及MC-LR(30μmol/L)+DFO(1 mmol/L)染毒组,培养4 h。采用二氯荧光素双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测细胞内ROS含量,采用二苯基-1-芘基膦(DPPP)荧光探针法检测细胞脂质过氧化物含量。结果仅100μmol/L MC-LR染毒24 h后细胞存活率明显低于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。与30μmol/L的MC-LR染毒组比较,溶剂对照组和MC-LR+DFO染毒组细胞内ROS含量均较低,差异有统计学意义(P<0.01)。10～30μmol/L的MC-LR染毒组细胞脂质过氧化物含量明显高于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);而MC-LR+DFO染毒组细胞脂质过氧化物含量低于MC-LR染毒组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MC-LR在非细胞毒性的剂量下可诱导人肝癌HepG2细胞产生ROS,引起脂质过氧化。
- 农清清Takeuchi T张志勇何敏
- 关键词：微囊藻毒素-LR活性氧脂质过氧化
- 不同荧光探针检测微囊藻毒素-LR诱导的氧自由基
- 2011年
- 目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝细胞内超氧阴离子自由基(O2.-)、羟自由基(.OH)水平的影响,探讨不同荧光探针的检测效果。方法调整人肝癌HepG2细胞密度为5×104/mL,分别设终浓度为10,30,100μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)对照组以及MC-LR(100μmol/L)+DFO(1 mmol/L)染毒组,另设溶剂对照组(0.1%DMSO),培养4 h后应用荧光探针氢化乙啶(HE)和2-[6-(4'-羟基)苯氧基-3H-占吨醇-3-on-9-yl]-苯甲酸(HPF)分别检测细胞内O2.-和.OH含量。结果 30～100μmol/L的MC-LR染毒4 h后细胞内O2.-和.OH含量明显高于溶剂对照组(P<0.05),染毒剂量与.OH含量之间呈现剂量-反应关系,去铁敏和MC-LR联合染毒组的O2.-和.OH含量明显低于100μmol/L MC-LR染毒组(P<0.05)。结论 MC-LR可引起人肝癌HepG2细胞内O2.-和.OH含量升高,用荧光探针HE和HPF能够快速、灵敏地检测细胞内的超氧阴离子自由基和羟自由基水平。
- 农清清Toru TakeuchiHiroko IndoHideyuki Majima张志勇
- 关键词：微囊藻毒素-LR超氧阴离子自由基羟自由基荧光探针
- 二烯丙基硫醚拮抗微囊藻毒素-LR致细胞凋亡
- 2011年
- 目的探讨二烯丙基硫醚(DAS)对微囊藻毒素-LR(MCLR)诱导的细胞凋亡及活性氧产生的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HT17,用1μmol/L MCLR染毒的同时给予DAS(0.02～2 mmol/L)作用4、24h,同时设立溶剂对照组、DAS对照组和单纯MCLR染毒组。应用四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,采用荧光探针2-[6-(4'-羟基)苯氧基-3H-占吨醇-3-on-9-yl]-苯甲酸检测细胞内活性氧水平。结果 0.2和2 mmol/LDAS干预组细胞存活率分别为(80.91±5.25)%,(90.13±4.47)%,高于MCLR染毒组的(69.50±3.03)%,差异有统计学意义(P<0.05);而0.2和2 mmol/L DAS干预组细胞凋亡率分别为(10.87±0.52)%,(8.52±0.55)%,低于MCLR染毒组的(13.29±1.16)%,差异有统计学意义(P<0.05);0.2和2 mmol/L DAS干预组的活性氧水平明显下降(P<0.05)。结论 DAS可拮抗MCLR诱导的活性氧产生及细胞凋亡。
- 农清清张志勇何敏覃健李春宏何灏逾
- 关键词：微囊藻毒素-LR活性氧细胞凋亡
- 微囊藻毒素-LR对活性氧产生及细胞色素P450各亚型表达的影响
- 2011年
- [目的]探讨低剂量微囊藻毒素-LR(MCLR)诱导细胞内活性氧(ROS)产生的潜在来源。[方法]采用转染有机阴离子转运多肽OATP1B3的人胚肾细胞株HEK293-OATP1B3,设3个浓度的MCLR处理组(10、20、50nmol/L)和未处理对照组(0.1%二甲基亚砜)。染毒4、24h后,测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,用荧光探针法检测细胞内ROS水平,采用实时荧光定量聚合酯链反应检测细胞色素P4501A1(CYP1A1)、1A2、2E1 mRNA的表达水平。[结果]低浓度(10～50nmol/L)的MCLR作用HEK293-OATP1B3细胞4h未产生明显细胞毒性;24h后,LDH漏出率随着处理浓度的增加而增加。50nmol/L MCLR处理细胞4h后引起ROS水平明显升高(P<0.01)。同时,MCLR还上调了CYP2E1的mRNA表达水平(P<0.01);但未影响CYP1A1 mRNA的表达;对照组和MCLR处理组的CYP1A2 mRNA表达水平均非常低。[结论]低剂量MCLR可诱导细胞内ROS产生和上调CYP2E1mRNA表达,提示CYP2E1可能是MCLR诱导ROS产生的一个潜在来源。
- 农清清小松正治张志勇何敏
- 关键词：微囊藻毒素-LR活性氧细胞色素P4502E1
