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国家自然科学基金(31240082)

作品数:4 被引量:2H指数:1
相关作者:汪德强张绍城张宏鹏王石磊靳鑫更多>>
相关机构:重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院绵阳市中心医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 3篇球菌
  • 2篇蛋白
  • 2篇药物
  • 2篇葡萄球菌
  • 2篇金黄色葡萄球...
  • 2篇菌药
  • 2篇抗菌
  • 2篇抗菌药
  • 2篇抗菌药物
  • 2篇黄色葡萄球菌
  • 2篇表达纯化
  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇蛋白质
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学功能
  • 1篇热稳定
  • 1篇热稳定性

机构

  • 4篇重庆医科大学
  • 2篇重庆医科大学...
  • 1篇成都中医药大...
  • 1篇教育部
  • 1篇绵阳市中心医...

作者

  • 4篇汪德强
  • 2篇张宏鹏
  • 2篇张绍城
  • 1篇牛司强
  • 1篇黄爱龙
  • 1篇郭珍
  • 1篇吴爽
  • 1篇赵沙沙
  • 1篇魏杰
  • 1篇张祥
  • 1篇阳媛
  • 1篇靳鑫
  • 1篇王石磊

传媒

  • 4篇重庆医科大学...

年份

  • 1篇2019
  • 1篇2015
  • 2篇2014
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长
2014年
目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。
张绍城郭珍张宏鹏苟冶然龙小滨汪德强
关键词:金黄色葡萄球菌抗菌药物
人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定被引量:2
2019年
目的:高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法:人工合成经密码子优化的 NGAL 基因,构建原核表达重组质粒 pW28-NGAL,IPTG 诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的 rhNGAL 抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G 亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争 ELISA 法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE 分析纯度;最后运用 Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果:高效获得高纯度 NGAL 重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得 6 株高效价单克隆抗体;其中,25 号单抗为 IgG1 亚型,余者均属 IgG2a 亚型,且 19、35 号单抗的亲和常数分别为 3.06×10^9、2.14×10^9。SDS-PAGE 分析表明纯度均大于 90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论:本研究利用密码子优化技术高效表达制备了 NGAL 重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为 NGAL 的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。
王石磊靳鑫魏杰张祥阳媛牛司强汪德强
关键词:密码子优化中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白多克隆抗体单克隆抗体
肺炎链球菌热休克蛋白Grp E的表达、纯化及热稳定性研究
2014年
目的:肺炎链球菌可引起细菌性肺炎和脑膜炎、发热性菌血症等多种疾病。对肺炎链球菌热休克蛋白Grp E进行克隆表达,纯化及热稳定性测定,以便于进一步分析肺炎链球菌感染的分子机制。方法:利用PCR技术扩增Grp E基因,构建重组质粒p W28-Grp E,并在大肠杆菌(escherichia coli,E.coli)B834中表达,Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化Grp E蛋白,Hiload Superdex 75凝胶层析柱分析在溶液中的聚集状态,热稳定性(thermal shift assay,TSA)法测定热稳定性。结果:1成功构建重组质粒p W28-Grp E,在表达菌E.coli B834中可溶性表达。2获得高纯度(95.0%以上)Grp E蛋白,发现该蛋白在溶液中以二聚体形式存在。3测定Grp E蛋白在p H 6.0、20 mmol/L盐浓度缓冲液中有较高热稳定性。结论:利用经典的蛋白质克隆表达纯化技术,获得了高表达量高纯度的Grp E蛋白,并初步测定其热稳定性为下一步蛋白晶体培养、三维结构解析及感染机制研究提供重要基础。
张宏鹏赵沙沙龙小滨吴爽白垒罗淼黄爱龙汪德强
关键词:肺炎链球菌热稳定性
金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状
2015年
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中Sdr E蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现Sdr E蛋白质的表达几乎不受环境因素(包括温度、金属离子)的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现Sdr E蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,Sdr E蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现Sdr E蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了Sdr E蛋白质的生物学功能,为基于Sdr E蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。
张绍城汪德强罗淼
关键词:金黄色葡萄球菌生物学功能抗菌药物
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