山东省农业科学院高技术自主创新基金(2006YCX023)
- 作品数：2 被引量：10H指数：1
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- 哺乳仔猪渗出性皮炎的病原学诊断及综合防治被引量：1
- 2009年
- 对发生渗出性皮炎(exudative epidermitis,EE)的病死仔猪进行病原学诊断,通过染色特性、生化试验、致病性试验及药敏试验,结合PCR方法对其16S rDNA基因序列分析进行鉴定。结果表明,病原为猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌混合感染,对小鼠均有致病性,且能从死亡小鼠上分离到相同病原菌。分离菌株混合培养物对头孢类等药物高度敏感,对氯霉素等药物中度敏感,对四环素和红霉素耐药。提示可使用敏感药物进行预防和治疗,注重平时的饲养管理和环境消毒是预防本病的重要措施。
- 齐静孙守礼杜以军白华朱小玲张秀美刘玉庆
- 关键词：仔猪渗出性皮炎葡萄球菌药敏试验
- 鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗病毒活性被引量：9
- 2009年
- 【目的】克隆鸡γ-干扰素(chIFNγ-)基因,大肠杆菌表达及产物纯化与活性检测。【方法】通过RT-PCR方法用ConA刺激的20日龄SPF鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出chIFNγ-成熟蛋白基因cDNA,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a(+)-chIFNγ-,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。利用MDCK-VSV系统测定抗病毒活性。【结果】克隆得到456 bp的chIFNγ-成熟蛋白编码基因,大肠杆菌中成功表达chIFNγ-蛋白,分子量约为31.0 kDa,能与抗His的单克隆抗体和兔源多抗血清发生特异性反应。表达蛋白一部分形成包涵体,另一部分以可溶形式存在,可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率为3.0 mg/mL。生物学活性试验表明,1∶32稀释纯化的重组chIFNγ-(rchIFNγ-)孵育MDCK细胞后能抵抗100TCID50的VSV攻击。【结论】通过镍柱天然纯化获得的rchIFNγ-具有较好的抗病毒活性,为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础。
- 齐静杜以军朱小玲胡北侠孙守礼张秀美刘玉庆
- 关键词：原核表达纯化抗病毒活性
