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国家高技术研究发展计划(2011AA100404): 作品数：31 被引量：118H指数：7; 相关作者：闫学春叶星栾培贤田园园孙成飞更多>>; 相关机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所中国水产科学研究院珠江水产研究所上海海洋大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

鲤鲫杂交回交鲫染色体核型及DNA含量的分析被引量：3: 2014年; 将性成熟的鲤鲫杂交鱼一代（F1）的雌鱼与雄性红鲫鱼杂交，获得了回交鲫子代，分析了平均体质量94.2g的1龄回交鲫子一代的细胞染色体核型，测定了其DNA含量。肾细胞直接制片法表明：回交鲫子代染色体由147条组成，即3n=147，NF=222，其核型公式为：3n=51m＋24sm＋27st＋45t。流式细胞记数法结果表明：在20尾鱼中有14尾回交鲫子代细胞的DNA含量是对照鱼（红鲫鱼）的1.5倍，占总鱼数的70%；6尾在2～3倍体之间，非常接近三倍体，占总鱼数的30%。本结果与其细胞染色体核型分析结果基本一致，说明该鱼是以三倍体为主的回交种。; 闫学春梁利群; 关键词：回交后代染色体核型 DNA含量

Progress in studies of fish reproductive development regulation被引量：10: 2013年; Mechanisms of the animal reproductive development are an important research field in life sciences.The study of the reproductive development and regulatory mechanisms in fishes is important for elucidating the mechanisms of animal reproduction.This paper summarizes recent advances in the mechanisms of fish sex determination and differentiation,of fish gonad development and maturation,and of fish germ cell development,as well as the according regulating strategies.Fishes comprise an evolutionary stage that links invertebrates and higher vertebrates.They include diversiform species,and almost all vertebrate types of reproduction have been found in fishes.All these will lead to important advances in the regulatory mechanisms of animal reproduction by using fishes as model organisms.It will also enable novel fish breeding techniques when new controllable on-off strategies of reproduction and/or sex in fishes have been developed.; CHEN JiHU WeiZHU ZuoYan; 关键词：发育调控无脊椎动物生殖发育动物繁殖性别决定

显微介导远缘基因鲤家系的建立及遗传多样性分析被引量：3: 2013年; 运用显微介导远缘杂交技术,将未经遗传修饰的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入受体鲤(Cyprinus carpio L·)内,以期通过这种基因组水平的远缘杂交技术改善受体鲤的品质。创建的远缘基因鲤提高了鲤的品质,丰富了鲤的遗传基础。本研究对48尾显微介导远缘基因鲤亲鱼进行标记取样,通过20个具有多态的鲤微卫星引物分析,选出在中度遗传距离(0.5～0.6)的亲本进行繁殖,从子代群体中选出品质性状优良的3个家系为研究对象。利用微卫星标记,分别对3个家系进行了遗传背景分析。结果表明,3个家系的平均有效等位基因数(Ne)分别为2.153 5、2.384 0和2.411 0;平均观测杂合度(Ho)分别为0.482 5、0.430 0和0.445 0;平均期望杂合度(He)分别为0.519 5、0.572 0和0.570 0;平均多态信息含量(PIC)分别为0.430 0、0.471 5和0.494 5。其遗传多样性处于中度多态(0.25; 杜科闫学春李超曹顶臣周丹马吉敏孙效文赵元凤; 关键词：微卫星标记

RNA干扰MSTN基因鲤的肌纤维密度及染色体核型分析: 2016年; 本实验分析RNA干扰MSTN基因鲤(以下简称RNA干扰鲤,体质量为116.2g和110.3g)的染色体,测定该鲤肌肉中的肌纤维密度。结果表明:(1)三组实验鱼的肌纤维密度分别为163.7根/mm^2、171.9根/mm^2和162根/mm^2,对照鱼的普通鲤(Common carp)为142根/mm^2,实验鱼高于对照鱼。单因素方差分析表明:实验鱼组间肌纤维密度差异不显著(F=0.83,P=0.44>0.05),而与对照鱼差异显著(F=5.24,P=0.034<0.05)。(2)PHA和秋水仙素体内注射法分析核型表明,实验鱼的染色体数为2n=100,核型公式为:2n=30m+24sm+28st+18t,臂比(NF)156,对照鱼染色体数为2n=100,核型公式为:2n=30m+26sm+28st+16t,臂比(NF)156。结果说明RNA干扰基因的插入并未影响鲤染色体组成。; 闫学春栾培贤何立川吴学工; 关键词：RNA干扰 MSTN 肌纤维密度染色体核型

显微介导中国对虾基因鲤肌肉蛋白差异表达分析: 2023年; 本文通过显微注射方法,将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpio L.)受精卵内,获得显微介导中国对虾基因鲤。为了研究显微介导中国对虾基因鲤蛋白质的表达变化,利用iTRAQ技术定量蛋白质测序分析了未进行显微介导和显微介导中国明对虾基因的2种鲤的肌肉组织,寻找与氨基酸和脂肪酸相关的差异表达蛋白,并分析了差异表达蛋白GO功能注释和KEGG代谢通路。结果共鉴定蛋白质999个,表达差异蛋白92个,其中上调蛋白58个,下调蛋白34个。差异蛋白Pathway富集分析表明,显著富集于脂肪酸和氨基酸等代谢通路上的差异蛋白有13个,其中在精氨酸和脯氨酸代谢通路中发现的上调7.51倍的肌酸激酶(creatine kinase)有促进鱼类肌肉发育的作用;而在脂肪酸代谢通路中发现的下调0.59倍的线粒体三功能蛋白(mitochondrial trifunctional protein),有提高鱼体内多种饱和与不饱和脂肪酸含量的作用。同时对筛选到的两个蛋白进行实时荧光定量PCR验证,证实了蛋白质组的分析结果。; 闫学春张颖栾培贤; 关键词：中国明对虾 ITRAQ

Tgf2转座系统在转RFP基因斑马鱼上的应用被引量：2: 2014年; 提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为76.6%。转红色荧光蛋白基因斑马鱼首代F0培育至性成熟,将其中的10尾F0斑马鱼分别与野生型斑马鱼进行配对繁殖,其中1个组合产生了体表呈现均匀红色荧光的F1个体,因此RFP在F0的整合率为10%。将红色荧光F1个体培育至性成熟并与野生型鱼配对繁殖,F2的阳性个体占69%。本研究结果说明,由Tgf2转座子介导的转基因技术,可有效提高目的基因的转植效率与整合效率,在转基因鱼构建以及相关研究中具有开发应用前景。; 吴芳叶星邹曙明张莉莉孙成飞田园园白俊杰; 关键词：斑马鱼转基因红色荧光蛋白

转基因鲤与普通鲤鱼精巢结构和发育的对比观察: 2013年; 通过光学显微镜对转大麻哈鱼生长激素基因鲤（以下简称转基因鲤）和鲤的精巢组织结构和发育进行比较观察。结果表明：转基因鲤和鲤鱼精巢组织结构基本上相同,都属于壶腹型精巢,精巢壁由两层膜构成,外层为腹膜,内层为白膜,二者精小叶的排列都不规则,每个小叶由许多精小囊组成。精子发生增殖、生长、成熟整个发育过程都在精小囊中进行,精子成熟后从精小囊进入小叶腔内。转基因鲤和鲤鱼精子的头部直径分别为2.60±0.026μm;2.58±0.024μm。性腺发育观察,7月份时在转基因鲤的精巢中精原细胞和精母细胞占多数;鲤鱼精巢中以精原细胞为主。8月份时转基因鲤精巢中精原细胞明显减少,而精母细胞开始增加,并有少量精子细胞和精子出现;鲤鱼精巢中也发现精子细胞和精子,9月份时转基因鲤和鲤鱼精巢中大多都为精子细胞和精子。通过对7~9三个月雄性发育程度作T检验,二者鱼的雄性性腺每个月发育程度有所不同但差异并不显著（P〉0.05）。结果显示,转基因鲤和鲤鱼精巢组织结构基本上相同,转基因鲤与鲤鱼精巢发育都能达到性成熟,性腺发育程度无显著差异。; 关海红梁利群; 关键词：鲤鱼性腺发育

尼罗罗非鱼γ-干扰素基因的克隆、结构分析及组织表达被引量：5: 2017年; γ-干扰素(interferon,IFN)是调控天然免疫与细胞免疫的一种重要细胞因子,在抵抗病毒入侵和细菌感染中发挥重要作用。该研究从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)脾脏组织中扩增到γ-干扰素基因的c DNA,大小为621 bp,编码206个氨基酸。生物信息学分析表明,尼罗罗非鱼γ-干扰素分子(On IFNγ)具有信号肽、IFN特征序列及核定位信号。预测的三级结构与人类IFNγ晶体结构最相似。q PCR检测显示,IFNγ在正常鱼体内的脾脏中表达量最高,其次是肠、鳃和肾脏。感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)后,On IFNγ在脾脏、肾和鳃中的表达均显著上调(P<0.05)。On IFNγ在相关免疫器官中的高表达、受感染后的表达上调,说明其在罗非鱼免疫防御中可能具有重要作用。该研究为进一步开展On IFNγ基因的功能研究、探讨其在抗病转基因及抗病选育中的开发应用奠定了基础。; 余嘉欣吴芳孙成飞董浚键田园园叶星; 关键词：尼罗罗非鱼 Γ-干扰素生物信息学

Tgf2转座子介导鲤Fst1基因元件在鲤中的转基因效率研究被引量：7: 2014年; 卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PCR检测,转基因鲤Fst1外源基因的整合率平均为44.7%,对其中4尾转基因阳性鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证,结果表明阳性鲤中均含有转基因目的片段。说明Tgf2转座子转基因系统可在鲤中实现较高的转座效率,为进一步研究卵泡抑素在鲤肌肉发育中的功能奠定了基础。; 闫学春钟莎莎徐鹏邹曙明孙效文

3种鲤鲫杂交回交后代染色体核型分析: 2015年; 采用PHA和秋水仙素体内培养法,取鱼肾细胞,用空气干燥法制备3种回交鲤(鲤鲫杂交♀×鲤♂)、回交镜鲤(鲤鲫杂交♀×镜鲤♂)、回交荷包红鲤(鲤鲫杂交♀×荷包红鲤♂)的染色体。经核型分析,回交鲤三倍体的染色体数为3n=150,核型公式为:3n=60m+24sm+36st+30t,臂比(NF)234;回交镜鲤三倍体的染色体数为3n=150,核型公式为:3n=63m+45sm+12st+30t,臂比(NF)258;回交荷包红鲤三倍体的染色体数为3n=150,核型公式为:3n=66m+36sm+18st+30t,臂比(NF)252。; 闫学春栾培贤梁利群; 关键词：镜鲤荷包红鲤染色体核型

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