国家自然科学基金(30500243)
- 作品数：7 被引量：33H指数：3
- 相关作者：孟莹李旭张小兰黄茂梁张振书更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院北京军区总医院广州军区总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南方医科大学南方医院院长基金广东省中医药管理局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 培哚普利和氯沙坦抗实验性肺纤维化的实验研究被引量：8
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)-培哚普利和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT-1受体)阻滞剂-氯沙坦对实验性肺纤维化的影响及其作用机制。方法雄性Wistar大鼠24只,体质量250～280g,分为以下4组。模型组:平阳霉素5mg·kg-1一次性气管内注入诱导肺纤维化;氯沙坦治疗组:氯沙坦10mg·kg-1灌胃,每日1次;培哚普利治疗组:培哚普利2mg·kg-1灌胃,每日1次;对照组:生理盐水气管内注入。第4周取材,Masson三色染色检测大鼠肺组织学改变;用氯氨T法测定肺组织羟脯氨酸含量;免疫蛋白质印迹法检测AT-1受体、TGF-β1蛋白的表达;电泳迁移率变更分析(EMSA)检测肺组织NF-κB的活性;免疫蛋白质印迹检测IκBα的表达;明胶酶法测定金属蛋白酶-2,9的活性。结果培哚普利组和氯沙坦组大鼠肺纤维化分级和肺组织羟脯氨酸含量低于模型组;培哚普利组AT-1受体蛋白质表达水平低于模型组和氯沙坦组,高于对照组(P<0.05);氯沙坦组AT-1受体蛋白质表达水平与模型组没有明显差异(P>0.05)。培哚普利组和氯沙坦组TGF-β1蛋白质的表达低于模型组(P<0.05);培哚普利组、氯沙坦组NF-κB的活性与对照组相比无显著差异(P>0.05);模型组NF-κB的活性高于对照组、培哚普利组和氯沙坦组(P<0.01)。对照组、培哚普利组和氯沙坦组IkB的表达高于模型组(P<0.01);培哚普利组和氯沙坦组IkB的表达与对照组相比无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,培哚普利组、氯沙坦组和模型组金属蛋白酶-2,9活性增强(P<0.05);模型组金属蛋白酶-2,9活性高于培哚普利组和氯沙坦组(P<0.01)。结论培哚普利和氯沙坦可能通过抑制肺组织TGF-β1的表达以及NF-κB和金属蛋白酶-2,9的活性,从而发挥抗肺纤维化作用。
- 孟莹李旭蔡绍曦佟万成程远雄
- 关键词：肾素-血管紧张素-醛固酮系统血管紧张素转化酶抑制剂肺纤维化
- 血管紧张素Ⅱ-1型受体基因静默对肝枯否细胞NF-κB活性的影响
- 2009年
- 目的探讨肝枯否细胞血管紧张素Ⅱ1型受体(AT-1受体)基因静默对肝枯否细胞NF-κB信号通路的影响。方法采用原代分离培养的肝枯否细胞,免疫组化检测AT-1受体在肝枯否细胞的表达。构建pSilencer/AT-1α受体siRNA质粒,将其转染肝枯否细胞,予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激60min,设立阴性对照。凝胶电泳移动抑制实验检测NF-κBDNA结合活性。结果肝枯否细胞可以表达AT-1受体。AngⅡ可刺激肝枯否细胞NF-κBDNA结合活性增强;pSilencer/AT-1α受体siRNA转染细胞后可显著抑制AngⅡ诱导的NF-κBDNA结合活增强。结论AngⅡ可经肝枯否细胞AT-1α受体激活肝枯否细胞NF-κB活性。
- 李旭孟莹周高速张振书
- 血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-kB信号通路的影响被引量：2
- 2009年
- 目的阐明血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肺泡巨噬细胞核转录因子xB（NF-kB）信号通路的影响。方法收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液，分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞。予10^-6MAngⅡ刺激15，30，60，120min。另外，予AT-1受体阻断剂irbesaitan（10^-6 M）预处理肺泡巨噬细胞60min后再予10^-6M AngⅡ刺激60min。设置对照组。凝胶电泳移动抑制实验（EMSA）检测NFxB的结合活性。免疫蛋白质印迹检测胞浆内IxBα的表达。RT-PCR检测TNF-a和ICAM-1的表达。应用SPSS13．0软件进行One-Way ANOVA方差分析，多重比较采用LSD法。以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15minNF-KB结合活性增强，60min达到峰值。AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-kB结合活性增强。与对照组（1．0）相比，AngⅡ处理组（0．29±0．11）IkBa表达减弱，且差异具有统计学意义（P=0．013）。与AngⅡ处理组相比，AngⅡ＋irbesartan处理组IkBa表达（0．83±0．12）则增强，且差异具有统计学意义（P=0．001）。与对照组（0．42±0．099）相比，AngⅡ处理组TNF-α（1．13±0．17）表达增强，且差异具有统计学意义（P=0．001）。与AngⅡ处理组相比，AngⅡ＋irbesartan处理组（0．77±0．15）减弱，且差异具有统计学意义（P=0．02）。与对照组ICAM-1表达（0．16±0．050）相比，AngⅡ处理组（0．55±0．08）增强且差异具有统计学意义（P=0．003）。与AngⅡ处理组相比，AngⅡ＋irbesartan处理组（0．32±0．07）减弱，且差异具有统计学意义（P=0．001）。结论AngⅡ对肺洵巨噬细朐NF-KB通路有诈向调节作用。
- 孟莹李旭蔡绍曦周高速
- 关键词：核转录因子KB肺泡巨噬细胞急性肺损伤
- 血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞早期生长反应因子-1通路的调控作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肝星状细胞(HSC)早期生长反应因子-1(EGR-1)信号转导通路的影响。方法采用HSC-T6细胞株,分别予AngⅡ1μmol/L处理10min、30min,Western blot检测磷酸化P42/44蛋白的表达。另外,观察AT-1受体阻滞剂-irbesartan、ERK1/2特异性阻断剂-U0126、抗氧化剂-乙酰半胱氨酸(NAC)(均预处理60min,再予AngⅡ刺激)和TNFα对磷酸化P42/44蛋白表达的影响。此外,予AngⅡ、irbesartan、U0126、NAC和ACEI处理后,电泳迁移率变更分析(EMSA)检测EGR-1DNA结合活性的变化;Westernblot检测血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)蛋白的表达。免疫组化检测AngⅡ对HSCPDGF-B蛋白表达的影响。结果AngⅡ可诱导磷酸化P42/44的表达。U0126和irbesartan可抑制磷酸化P42/44的表达。EMSA结果显示:AngⅡ干预HSC0.5h后,EGR-1DNA结合活性开始增加,1h达到峰值,然后逐渐减低。U0126和irbesartan处理后可显著抑制AngⅡ诱导的EGR-1活性增强。较高浓度的ACEI可抑制EGR-1的活性,当ACEI浓度为0.1nmol/L时EGR-1的活性增强。NAC对EGR-1的活性无抑制作用。AngⅡ可诱导HSCPDGF-B蛋白表达,irbesartan可抑制AngⅡ诱导的PDGF-B表达。U0126、NAC和ACEI对PDGF-B表达无抑制作用。结论AngⅡ可经ERK1/2通路诱导HSCEGR-1活性增强。AngⅡ可经EGR-1通路调控PDGF-B的表达。
- 李旭孟莹黄茂梁张小兰张振书
- 关键词：肾素-血管紧张素-醛固酮系统早期生长反应因子-1肝纤维化
- 血管紧张素Ⅱ对大鼠肝星状细胞收缩及Rho-Rock通路的影响被引量：12
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肝星状细胞(HSC)Rock通路的影响机制。方法采用HSC-T6细胞株,给予AngⅡ1μmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;另予AngⅡ10μmol/L处理,免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的表达水平。观察AngⅡ1型受体(AT-1受体)阻断剂伊贝沙坦和Rho激酶特异性抑制剂Y27632对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rock通路Rock2(Rho kinase 2)mRNA的表达。结果AngⅡ可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15min达到峰值后逐渐减低。伊贝沙坦和Y27632处理组可抑制AngⅡ诱导的MLC蛋白磷酸化水平。AngⅡ处理组Rock2mRNA的表达显著增强,伊贝沙坦和Y27632均可抑制Rock2 mRNA的表达。结论AngⅡ可以通过Rock通路来诱导HSC的收缩。
- 张小兰李旭肖冰黄茂梁孟莹李鹰飞王媛媛宋卫兵
- 关键词：信号通路肝星状细胞细胞收缩
- AT-1受体、ACE基因静默对肝星状细胞NF-κB活性的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨肝星状细胞血管紧张素Ⅱ1型(AT-1)受体及血管紧张素转换酶(ACE)基因静默对肝星状细胞NF-κB活性的影响。方法采用HSC-T6细胞系。构建pSilencer/AT-1α受体siRNA、pSilencer/ACE siRNA质粒,将其转染HSC-T6,予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)干预,设立对照组。凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NF-κB DNA结合活性。结果EMSA显示:AngⅡ可刺激肝星状细胞NF-κB DNA结合活性增强;pSilencer/AT-1α受体siRNA转染细胞后可显著抑制AngⅡ诱导的NF-κB DNA结合活性增强。pSilencer/ACE siRNA转染细胞后可抑制NF-κB DNA结合活性。结论AT-1受体、ACE基因静默可抑制肝星状细胞NF-κB的活性。
- 李旭张艺军孟莹周高速张振书
- 关键词：肝星状细胞核因子-ΚB血管紧张素转换酶
- Rho—Rock通路在血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞收缩中的作用被引量：8
- 2008年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促进肝星状细胞（HSC）收缩时Rho激酶介导的非Ca^2＋依赖性信号转导通路的作用机制。方法采用HSC—T6细胞系，给予AngⅡ10μmol／L处理，聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性；蛋白质印迹法检测肌球蛋白轻链（MLC）和磷酸化MLC表达水平。观察AngⅡ1型受体阻断剂伊贝沙坦、蛋白激酶C特异性抑制剂stauro、Rho激酶特异性抑制剂Y27632、肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7对磷酸化MLC表达水平的影响；逆转录聚合酶链反应检测Rho-Rock通路RhoA激酶2（Rock2）、RhoAGTP、Rho鸟核苷酸转化因子（RhoGEF）mRNA的表达。结果AngⅡ可诱导HSC收缩；还可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化，并呈时间依赖性，15min达到峰值后逐渐减低。AngⅡ＋伊贝沙坦组和AngⅡ＋Y27632组诱导的MLC蛋白磷酸化水平均低于AngⅡ组（1．12±0．09、1．22±0．10vs1．33±0．06，P=0．003）；而AngⅡ＋ML-7＋stauro组磷酸化MLC蛋白水平（1．43±0．09）高于AngⅡ＋Y27632组（P=0．003）；AngⅡ＋Y27632＋ML-7＋stauro组水平较低（0．64±0．04，P=0．000）。AngⅡ组Rock2、RhoAGTP、RhoGEF mRNA的表达均高于相应对照组（0．36±0．01vs0．12±0．01、0．80±0．01vs0．40±0．02、0．65±0．11vs0．33±0．09，均P〈0．05），AngⅡ＋伊贝沙坦组3种元件的表达均低于AngⅡ组。AngⅡ＋Y27632组Rock2与RhoGEF mRNA的表达（0．15±0．01、0．28±0．08）较AngⅡ组低，RhoA GTP的表达（1．14±0．02）则较高。AngⅡ＋ML-7＋stauro组3种元件的表达均高于对照组，AngⅡ＋Y27632＋ML-7＋stauro3组3种元件的表达（0．23±0．01、0．83±0．02、0．69±0．08）均高于AngⅡ＋ML-7＋stauro组（均P〈0．05）。结论AngⅡ可以通过Rho—Rock通路来诱导HSC的收缩。
- 张小兰肖冰李旭黄茂梁孟莹李鹰飞王媛媛宋卫兵
- 关键词：肾素-血管紧张素系统肝星状细胞
