国家自然科学基金(030471853)
- 作品数：12 被引量：39H指数：5
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- 相关机构：中南大学长沙市妇幼保健院更多>>
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- 正常氧及低氧环境下小干扰RNA抑制促红细胞生成素表达的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的特异性小干扰RNA(siRNA)对EPO表达的抑制作用,为视网膜新生血管的治疗提供新的途径。方法:体外培养NIH/3T3细胞,分成正常氧状态培养组和低氧培养组。通过脂质体(LF2000)将EPOsiRNA转染两组细胞。采用RT-PCR及Western blot技术观察正常氧及低氧环境下EPO siRNA对细胞内EPO表达的抑制效果。结果:正常氧及缺氧环境下,EPO siRNA能明显抑制NIH/3T3细胞内EPO mRNA及蛋白质的表达。结论:EPOsiRNA能显著抑制EPO的表达,为视网膜新生血管的基因治疗提供了新途径。
- 熊思齐夏晓波
- 关键词：促红细胞生成素小干扰RNANIH/3T3细胞
- 低氧诱导因子-1α干扰RNA对血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用被引量：6
- 2007年
- 目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)特异性小片段干扰RNA表达载体pSU-PERH1-siHIF1α对低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子(vas-cular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达的抑制作用。方法构建HIF-1α特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPERH1-siHIF1α,通过脂质体Lipofectamine2000分别介导pSUPERH1-siHIF1α转染低氧状态下培养的人低分化鼻咽鳞癌细胞(nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE2),对照组转染pSUPER空载体,采用半定量RT-PCR方法检测HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达。结果转染pSUPERH1-siHIF1α的CNE2细胞中HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达较对照组分别降低79.4%和65.7%。结论HIF-1α特异性小片段干扰RNA表达载体pSUPERH1-siHIF1α能明显抑制HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达。
- 许惠卓刘双珍夏晓波熊思齐王育科李岩
- 关键词：RNA干扰低氧诱导因子-1血管内皮生长因子
- 视网膜新生血管的治疗研究进展被引量：3
- 2008年
- 视网膜新生血管的发生是众多促血管生成因子间协同作用的结果。病理状态下以基质金属蛋白酶、促红细胞生成素、整合素为代表的促血管生成因子，可通过不同的作用途径，促进视网膜新生血管的发生。有研究者将促视网膜新生血管形成因子作为“靶点”进行靶向治疗研究，可有效地抑制视网膜新生血管的发生。为进一步了解其靶向治疗的机制和效果，有必要就视网膜新生血管形成中的靶分子和靶向治疗研究进展予以阐述，以期为视网膜新生血管的临床治疗提供理论依据。
- 熊思齐夏晓波
- 关键词：视网膜新生血管化基质金属蛋白酶促红细胞生成素
- RNA干扰对低分化鼻咽癌细胞血管内皮生长因子表达的抑制作用被引量：7
- 2006年
- 目的研究血管内皮生长因子(vascular endothe-lial growth factor,VEGF)的特异性小片段干扰RNA(siRNA)对低分化鼻咽癌细胞(nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE-2Z)VEGF表达的抑制作用,为视网膜新生血管的治疗提供新的途径。方法体外培养人CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(5%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用免疫细胞化学和ELISA法检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF蛋白质表达的差异。结果正常氧状态下培养的CNE-2Z细胞有VEGF165及VEGF121蛋白质的表达,主要见于细胞浆中(棕色颗粒),低氧状态下VEGF的表达增多。ELISA结果显示,正常氧状态下未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:419.72pg/ml、410.61 pg/ml、320.76 pg/ml;低氧状态下VEGF165的含量分别为:805.61 pg/ml、798.81 pg/ml、496.56 pg/ml,转染VEGFsiRNA组VEGF的表达下调。结论VEGFsiRNA有效地、特异地抑制CNE-2Z细胞VEGF蛋白质的表达,有望成为防治视网膜血管新生性病变的一种有效方法。
- 罗洁夏晓波熊思奇宋伟涛
- 关键词：血管内皮生长因子
- 缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子干扰性RNA对人血管内皮细胞血管内皮生长因子表达的抑制
- 2007年
- 目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）小片段干扰性RNA（siRNA）对人血管内皮细胞VEGF表达的影响。方法构建HIF-1α siRNA重组质粒。将体外培养的人血管内皮细胞（HUVEC12）分成常氧（20％）组和低氧（1％）组。低氧组中，采用脂质体Lipofectamine^TM 2000（LF2000）分别转染空载体质粒（空载体组）、HIF-1α siRNA（HIF-1α组）、VEGF165 siRNA（VEGF组）和HIF-1α siRNA＋VEGF165 siRNA（共转染组）。低氧组中未转染的细胞为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）鉴定基因转染效率；RT—PCR和免疫细胞化学法检测各组细胞中VEGF基因和蛋白表达的变化。结果成功构建HIF-1α siRNA重组质粒。人血管内皮细胞转染24h后，HIF-1α siRNA和VEGF-1α siRNA重组质粒有表达。常氧组细胞中仅见微弱的VEGF mRNA和蛋白表达，而低氧组表达明显上调；HIF-1α组、VEGF组和共转染组表达较对照组减弱，其中共转染组抑制效果最明显。结论HIF-1α和VEGF-1α siRNA能有效抑制人血管内皮细胞VEGF的表达。
- 蒋剑夏晓波许惠卓熊思齐刘双珍李岩
- 关键词：缺氧诱导因子1Α亚基血管内皮生长因子类
- 血管内皮生长因子干扰RNA对鼠视网膜中血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用被引量：2
- 2007年
- 目的研究血管内皮生长因子(vascular endothe-lial cell growthfactor,VEGF)小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对鼠视网膜VEGF mRNA的抑制作用,探讨其对视网膜新生血管治疗的可行性。方法体外培养人鼻咽癌细胞(CNE-2Z),分成正常氧培养组(20%O2)和低氧培养组(1%O2)。采用脂质体(LF2000)将VEGF siRNA转染两组细胞,RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,确立VEGF siRNA对VEGF mRNA的抑制效率。然后,建立高浓度氧(75%)诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型,以脂质体为载体,将VEGF siRNA重组质粒注射到鼠玻璃体腔内,RT-PCR检测视网膜组织中VEGF mRNA的表达水平。结果正常氧培养的CNE-2Z细胞有VEGF mRNA表达,低氧状态下VEGF mRNA表达增多,两者之间差异有显著性(P<0.01);与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGF siRNA均能明显抑制VEGF mRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGF siRNA的抑制效率比低氧状态高。高浓度氧诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型中,玻璃体腔注射VEGF siRNA组视网膜组织中VEGF mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论VEGF特异的siRNA能有效地抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z和C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型视网膜中VEGF mRNA的表达。
- 王育科夏晓波
- 关键词：视网膜新生血管
- 血管内皮生长因子干扰性RNA对鼠视网膜新生血管的抑制作用被引量：13
- 2006年
- 宋伟涛夏晓波许惠卓周蓉蓉王育科熊思齐刘双珍
- 关键词：基因疗法
- 干扰RNA抑制小鼠视网膜HIF-1α蛋白质的表达被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)特异性小片段干扰性RNA(siRNA)对小鼠视网膜HIF-1α蛋白质的抑制作用。方法:构建HIF-1α siRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α。选择7d龄C57BL/6J小鼠24只,其中6只为正常组(A);另18只建立缺氧诱导的视网膜新生血管模型,并随机分为:对照组(B)、空载体组(C组)和基因治疗组(D组),每组6只。于出舱前1d,向空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER空载体质粒;基因治疗组注射HIF-1αsiRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α。采用FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态变化;SP免疫组织化学检测各组间HIF-1α的表达差异。结果:荧光造影视网膜铺片显示,A组整个视网膜血管分布呈均匀网状;B、C组视网膜中周部可见大片无灌注区,见新生血管丛,伴荧光渗漏;D组无灌注区较B,C组明显减少,周边部毛细血管网基本正常,新生血管丛明显减少。免疫组织化学染色显示,A组HIF-1α蛋白表达阴性;B,C组在神经节细胞层呈阳性表达;D组在神经节细胞层呈弱阳性表达,较B,C组明显减少。结论:采用玻璃体腔注射,通过脂质体介导HIF-1αsiR-NA重组质粒pSUPERsiHIF-1α转染视网膜,有效地抑制了缺氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型视网膜中HIF-1α蛋白质的表达及视网膜新生血管的形成。
- 熊宇夏晓波许惠卓蒋剑宋伟涛刘双珍许雪亮
- 关键词：小干扰RNA缺氧诱导因子-1Α视网膜新生血管
- 脂质体介导缺氧诱导因子-1α特异性小干扰RNA重组质粒对小鼠视网膜新生血管的抑制作用被引量：1
- 2013年
- 【摘要】目的观察脂质体Lipofectamine“2000（LF2000）介导pSUPER为载体的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小干扰RNA重组质粒（pSUPERsi HIF-1α）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法构建重组质粒pSUPER-1α。将48只7日龄C57BL／6J小鼠分为正常组、空白对照组、空载体组和基因治疗组，每组12只。正常组小鼠在正常空气中饲养。空白对照组、空载体组和基因治疗组建立氧诱导的视网膜新生血管模型。后空白对照组小鼠不再作任何处理。于出舱前ld，空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER和LF2000脂质体混合物1μl，基因治疗组小鼠玻璃体腔注射重组质粒pSUPER-1α和LF2000脂质体混合物1μl。采用荧光造影视网膜铺片观察各组小鼠视网膜血管形态变化；作病理切片，光学显微镜下计数各组突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数；免疫组织化学染色法检测各组小鼠视网膜中HIF-1α、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达；逆转录聚合酶联反应（RT—PCR）检测各组小鼠视网膜中HIF-1amRNA的表达。结果视网膜铺片荧光显微镜观察显示，正常组小鼠整个视网膜血管分布呈均匀网状；空白对照组、空载体组小鼠视网膜中周部可见大片无灌注区及新生血管丛，伴荧光渗漏；基因治疗组无灌注区及新生血管丛空白对照组、空载体组明显减少，视网膜血管网状结构基本正常。光学显微镜观察发现，空白对照组、空载体组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较正常组明显增多，差异有统计学意义（F=5850．016，P〈O．05）；基因治疗组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较空白对照组明显下降，差异有统计学意义（F=3012．469，P〈0．05）。免疫组织化学染色结果显示，HIF-1α蛋白阳性表达主要位于细胞核中，VEGF蛋白阳性表达主要位于细胞浆中。正常组小鼠视网膜中HIF-1α蛋白表达�
- 熊宇夏晓波蒋剑宋伟涛
- 关键词：视网膜新生血管化脂质体基因转移技术
- 缺氧诱导因子-1α小片段干扰性RNA对人血管内皮细胞缺氧诱导因子-1α表达的调控被引量：1
- 2007年
- 目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)小片段干扰性RNA(siRNA)对人血管内皮细胞HIF-1α表达的影响。方法构建HIF-1αsiRNA重组质粒。将体外培养的人血管内皮细胞(HUVEC-12)分成常氧(20%)组和低氧(1%)组。低氧组又分为对照组、空载体组和HIF-1α组。采用脂质体LipofectamineTM 2000分别转染空载体质粒(空载体组)、HIF-1αsiRNA(HIF-1α组),对照组不作转染。采用SP免疫细胞化学法检测各组细胞中HIF-1α蛋白表达的变化,并进行计算机图像分析。结果对照组和空载体组细胞HIF-1α蛋白表达较常氧组增强,而HIF-1α组较对照组明显减弱。结论HIF-1αsiRNA能显著抑制HIF-1α的表达,为视网膜新生血管的基因治疗提供了新方法。
- 蒋剑夏晓波许惠卓熊思齐刘双珍
- 关键词：缺氧诱导因子-1ΑRNA干扰血管内皮细胞
