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桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：2: 2012年; 通过同源序列PCR克隆的方法,获得桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株的木聚糖酶编码基因xyl,该基因全长984 bp,编码327个氨基酸,无内含子序列,具有完整开放阅读框。其编码的氨基酸序列N端具有一段包含19个氨基酸的信号肽序列,并具有糖基水解酶第10家族(GH10)的保守催化域特征,推测该酶属于第10家族成员。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9相连接构建重组载体pPIC9-XYL,电击转化至毕赤酵母GS115菌株中。挑选阳性重组子经测序、酶活性以及SDS电泳分析表明,xyl基因成功在毕赤酵母中分泌表达,重组酶活性可达214.15 IU/mL。该重组酶最适温度与最适pH分别为50℃和4.5,且具有良好的pH和热稳定性。; 田谷顿宝庆王智李维维许修宏李桂英; 关键词：桔青霉木聚糖酶毕赤酵母酶学性质

果胶裂解酶基因的克隆与原核表达被引量：2: 2010年; 利用PCR技术从枯草芽孢杆菌T66(Bacillus subtilis)基因组DNA中扩增得到果胶裂解酶编码基因pl(GU644446),并构建基因表达载体pPAL7-pl重组质粒,转化受体菌E.coli BL21进行原核表达分析。诱导表达条件为温度37℃、时间4 h、IPTG浓度0.8 mol/L,经SDS-PAGE分析表明果胶裂解酶编码基因pl表达的重组酶蛋白相对分子质量为45 ku。对该基因重组酶粗酶液的酶学性质进行了初步分析,表明该酶最适反应温度为50℃、最适反应pH8,添加5.5 mmol/L的Ca2+的条件下,测得果胶裂解酶的最高比酶活为30 U/mL。含有果胶裂解酶编码基因pl的重组质粒遗传稳定。; 宋立立顿宝庆奚亚军彭源德白娜路明李桂英; 关键词：果胶裂解酶基因克隆原核表达酶学特性

糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达被引量：1: 2012年; 通过RT-PCR方法,以埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)总RNA为模板,克隆出糖化酶(glucoamylase,amyA)基因的成熟肽编码序列(1 857 bp),编码618个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanase A,xynA)基因的成熟肽编码序列(636 bp),编码211个氨基酸。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌ALX2。在ALX2发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(10.7 U/mL)和木聚糖酶活性(51.8 U/mL)。; 王智顿宝庆顾金刚赵萱田谷路明李桂英; 关键词：糖化酶木聚糖酶毕赤酵母

一株嗜热纤维素分解菌的分离及其酶学性质的初探被引量：9: 2009年; 利用海南热泉附近腐烂朽木及土壤,筛选分离到一株具有较高纤维素酶活性的纤维素分解菌WQ-50,经生理生化特性及遗传分析初步鉴定其为环状芽孢杆菌属菌株。当以复筛培养基发酵培养时,该菌株在55℃、pH 6条件下生长较好。在该条件下,以经碱预处理的玉米秸秆粉为唯一碳源发酵培养5 d时产酶达到最大值,羧甲基纤维素酶活性为6.8 IU/mL,滤纸酶活性为3.5 IU/mL。; 曲小爽顿宝庆郭明鸣宋立立许修宏张保明路明李桂英; 关键词：纤维素酶

桔青霉CR-2内切葡聚糖酶蛋白纯化研究初探被引量：1: 2010年; 以高效纤维素分解菌桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株为材料,利用分子筛及离子交换技术纯化分离其内切葡聚糖酶蛋白,首次获得了电泳纯的桔青霉内切葡聚糖酶蛋白组分,大小为27.26kDa,最适作用温度为60℃,最适作用pH为5。对研究桔青霉纤维素酶降解纤维素的作用机理以及该菌株的改造应用具有重要意义。; 顿宝庆曲小爽郭明鸣路明李桂英张保明; 关键词：桔青霉内切葡聚糖酶纯化

一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA被引量：3: 2012年; 以酿酒酵母单倍体CE N.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA。结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63μg/μL和3.77μg/μL,OD_(260/280)分别为2.10和2.04,OD_(260/230)分别为2.32和2.24,浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求。经PCR与荧光定量PCR检测,该方法提取的RNA无DNA污染,可作为PCR反应的模板,与Trizol方法提取RNA相比,该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h缩短为1.5 h,具有操作简单、高质、高效等优点,经多次试验证明,此方法同样适用于酿酒酵母总RNA的大量提取试验,有较高的实用价值。; 李维维顿宝庆王智曲娟娟; 关键词：RNA分离酿酒酵母热酚法 CDNA 荧光定量PCR

一株高纤维素酶活力纤维素分解菌的分离与鉴定被引量：44: 2008年; 从腐烂朽木及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌CDY-3,经初步鉴定其为芽孢杆菌属菌株。pH 5时,该菌羧甲基纤维素酶活性最高达14.59 IU,对滤纸有较强的降解能力。生理生化特性表明该菌最适生长条件为30℃,pH 7。; 顿宝庆吴薇王旭静曲小爽李桂英林敏路明张保明; 关键词：纤维素分解菌纤维素酶

产纤维素酶嗜热细菌R-250的分离、鉴定被引量：3: 2010年; 利用海南某温泉附近腐烂朽木及土壤,经富集培养分离筛选出高产纤维素酶的嗜热细菌R-250,经形态学和生理生化特性研究以及16S rDNA序列分析鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。以复筛培养基进行培养时,该菌生长的最适温度为50℃,最适pH值为5～6。在该条件下,以玉米秸秆为唯一碳源的产酶培养基产酶培养4d后CMCase酶活达到最高值为14.7IU/mL,滤纸酶活为6.74IU/mL。; 郭明鸣顿宝庆许修宏李桂英张保明路明; 关键词：纤维素分解菌嗜热

米根霉糖化酶、类芽孢杆菌木聚糖酶融合蛋白的真核分泌表达被引量：1: 2011年; 以米根霉(Rhizopus oryzae)3.866基因组DNA为模板,克隆得到糖化酶基因(glucoamylase gene,amyA),基因全长2049bp,编码604个氨基酸;以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出基因木聚糖酶基因(xylanase A gene,xynA)的成熟肽编码序列,长636bp,编码211个氨基酸。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌AX11。在AX11发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(5.8U/mL)和木聚糖酶活性(32.3U/mL)。; 王智宋立立顾金刚顿宝庆田谷路明李桂英; 关键词：糖化酶木聚糖酶毕赤酵母

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