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大口鲇抗菌相关蛋白的初步研究被引量：2: 2006年; 对健康大口鲇皮肤分泌液蛋白组分进行了分析，SDS-PAGE电泳表明其中有17种蛋白质．用饱和硫酸铵分级沉淀法发现在20％～50％的饱和度之间沉淀出来的蛋白有抗菌活性．该抗菌蛋白对G^＋和G^-菌有广谱抗菌活性，在pH5～8范围内稳定，并且在100℃下作用10min后活性依然稳定．同时检测了患病大口鲇重要组织提取液的抗菌活性，为进一步研究健康大口鲇抗菌蛋白奠定了基础．; 袁媛顾继锐屈刚伍翠芳张黎吴江谢显连徐恒; 关键词：南方大口鲇抗菌蛋白抗菌活性抗菌谱

普通变形杆菌TWN3株DNA疫苗的初步研究: 2009年; 普通变形杆菌TWN3分离自死亡大口鲇,菌的DNA文库已构建成功,通过免疫印迹法从文库中筛选到TWN3抗原片段PV4,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建DNA疫苗pcDNA3-PV4。肌肉注射免疫小鼠进行真核表达检测。免疫组织化学分析DNA疫苗在接种局部肌肉中抗原的表达,ELISA检测小鼠血清中的IgG及IFN-γ含量。免疫pcDNA3-PV4疫苗的小鼠肌肉细胞中检测到PV4相关抗原蛋白的表达,外周血中的IgG及IFN-γ显著高于免疫pcDNA3组。对小鼠进行免疫保护试验,免疫DNA疫苗的小鼠对TWN3菌有免疫力。初步显示构建的DNA疫苗有一定效果。试验结果为鱼类水体试验提供了参考依据,同时随着TWN3株菌DNA疫苗研究的深入,将对该疫苗最终大规模用于鱼类提供理论基础。; 王娟辜文博冯军顾继锐吴江徐恒; 关键词：DNA文库 DNA疫苗

草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶克隆及序列分析被引量：2: 2009年; 腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全长和基因组DNA全长。该基因全长1584 bp,包含一个1449 bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,与其他脊椎动物比对显示,其序列具有较高的保守性。草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因组DNA由13个外显子和12个内含子组成,其外显子拼接位点非常保守,遵循GT-AG原则。; 屈刚顾继锐辜文博朱文漓吴江刘汉元徐恒; 关键词：草鱼肠道克隆

草鱼胸腺素β_(11)的cDNA克隆及序列分析: 2012年; 以前期构建的草鱼肠道cDNA文库中β胸腺素EST序列为基础,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增草鱼胸腺素β_(11)(thymosinβ_(11),Tβ_(11))的cDNA序列全长(NCBI登录号:HM120850),该序列长320 bp,5'非翻译区47 bp,3'非翻译区141 bp,包含一个132 bp的开放读码框,编码43个氨基酸残基,蛋白质等电点为5.17,分子大小为4892 Da.与其他脊椎动物的同源性对比结果显示,草鱼与斑马鱼胸腺素β_(11)的同源性最高,达到93.0%.结构预测显示草鱼胸腺素β_(11)拥有典型的β胸腺素家族典型的二级结构.; 辜文博袁恬冯军顾继锐吴江刘汉元徐恒

南方鲇血清凝集素的研究被引量：1: 2006年; 从南方鲇(Silurusmeridionalis)血清分离到一种天然的凝集素分子,能够凝集多种不同的抗原物质,其组成成分为糖蛋白,具有耐热和耐酸碱性,对β-巯基乙醇敏感。凝集反应受温度、离子强度以及时间等因素的影响。经糖的专一性抑制实验显示,蔗糖和半乳糖对凝集反应有抑制作用,说明这2种糖分子是凝集素在识别和凝集过程中起一定作用的糖分子。; 张黎袁媛王娟顾继锐吴江谢显连徐恒; 关键词：凝集素理化性质

普通变形杆菌TWN-3株基因组文库构建及免疫印迹筛选被引量：3: 2007年; 在从患病大口鲇中分离到普通变形杆菌TWN-3株的基础上,将该菌总DNA用EcoRI不完全酶切后,分离5kb左右的片段,连接入pUC18质粒,转化E.coli BL21,构建基因组文库,得到3.6×103个重组子,远大于理论计算的1831个重组子,随机挑选重组子经EcoRI酶切鉴定重组率为100%,文库构建成功;将该菌裂解液与佐剂混合,免疫雄性新西兰大白兔,免疫程序结束后,抽血并分离血清,对用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后的文库进行免疫印迹筛选,最终得到8个阳性克隆子。本实验为该菌的DNA疫苗以及重要基因表达研究打下基础。; 张涛丁洁张黎刘莉曹海军王娟顾继锐伍翠芳吴江徐恒; 关键词：基因组文库免疫印迹

大口鲇致病菌的分离鉴定、系统发育分析及相关特性的研究被引量：20: 2007年; 从四川鲶科鱼类养殖场濒死的大口鲇(Silurus meridionalis Chen)体内分离到3株优势菌,人工感染试验表明菌株TWN3致病性最强。通过形态学观察、生理生化测定,结合DNA的G+Cmol%、16S rDNA序列同源性和系统发育分析,确定TWN3为普通变形杆菌(Proteus vulgaris)。再根据生理生化特性,可进一步确定TWN3属于普通变形杆菌(Proteus vulgaris)中的P.vulgarisBG3。该菌株不溶血;对庆大霉素等4种药物敏感;对小鼠有较强的致病性。生长特性研究表明,该菌最适生长温度37℃、最适pH6.0、37℃时盐度1.5%生长最适。普通变形杆菌致病性广泛,但作为养殖大口鲇的致病菌国内外未见报道。另外,对该菌的分类学研究、生长特性、感染途径及防治进行了讨论。; 曹海军李永文雷雨吴江徐恒张涛张学俊; 关键词：普通变形杆菌大口鲇致病菌 RDNA 系统发育分析

草鱼胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)的序列克隆及分析被引量：6: 2008年; 以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比对显示草鱼胞质苹果酸脱氢酶具有典型的苹果酸脱氢酶功能区保守序列,该酶与斑马鱼cMDH相似度最高达到95.5%,与模式植物拟兰介的相似度为57.8%,其预测三级结构具有典型cMDH功能区。Southern杂交结果表明草鱼cMDH属于多拷贝基因家族。; 朱文漓顾继锐辜文博吴江刘汉元徐恒; 关键词：肠道 CDNA 克隆

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