黑龙江省科技攻关计划(GB02C111)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 重组人乳头瘤病毒16型E6蛋白的表达、纯化和动物免疫效果分析被引量：2
- 2008年
- 目的诱导表达人乳头瘤病毒16型（HPVl6）E6蛋白，制备可溶性蛋白，并通过动物免疫进行免疫效果评估。方法采用IPTG诱导pQE30-HPVl6E6／BL21（DE3）重组菌株，表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定。提取包涵体进行变性处理，变性蛋白经Ni^2＋金属螯合层析纯化，将纯化产物用复性透析方法处理以获取可溶性蛋白。免疫BalB／c小鼠，检测血清抗体、CD4^＋／CD8^＋和IFN-γ。结果诱导后重组菌有相对分子量18000蛋白质表达，以不溶性包涵体为主要表达方式。目的蛋白可与HPV16E6多克隆抗体识别，纯化和透析处理后得到可溶性的蛋白。小鼠免疫后血清抗体滴度升高，淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋升高，IFN-γ未见升高。结论成功表达了HPV16E6蛋白，同时处理包涵体并制备了可溶性目的蛋白。目的蛋白可刺激小鼠体内产生有效的免疫反应，该蛋白的成功制备为患者血清抗体的检测和肿瘤细胞杀伤的免疫研究奠定了坚实基础。
- 商庆龙王燕陈思佳李承刚韩聪邵迪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6蛋白纯化免疫
- 5’-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析
- 2008年
- 目的获得抗人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区（VL）基因并分析序列。方法从分泌抗HPVl6L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录形成CD-NA，用5’-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，并测序及进行序列分析。结果VL基因全长336bp，编码112个氨基酸，基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征。结论5’-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列，为基因工程抗体研究奠定了良好基础。
- 王燕商庆龙陈思佳邵迪韩聪李茉谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型轻链可变区单克隆抗体
- 悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白
- 2007年
- 目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况；透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结果优化后，悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×10^5 cell／ml，以MOI（Multiplicity of Infection）=10接种重组病毒rBacV／HPVl6L1，72～84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察，在重组病毒感染的昆虫细胞内，存在HPV16L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件；电镜观察在重组病毒rBacV／HPV16L1感染的昆虫细胞中，HPV16L1蛋白可形成VLPs。
- 韩聪王燕商庆龙魏兰兰陈思佳
- 关键词：乳头状瘤病毒细胞病毒样颗粒
- 采用正交设计优化HPV16L1重组蛋白表达的实验研究被引量：1
- 2009年
- 通过正交试验对构建的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白的重组表达菌株pQE31-HPV16L1/M15(pREP4)进行表达条件的优化,以增加目的蛋白的表达量。实验选取影响蛋白表达的4个主要因素,分别为诱导时间、诱导剂浓度、细菌密度和诱导温度,采用四因素两水平正交试验,通过SDS-PAGE及Western blot测定重组表达蛋白,以Tanon凝胶成像系统分析目的蛋白含量作为检测条件优化效果的指标,所得数据采用SAS软件进行统计分析。实验结果表明在37℃、IPTG0.5mmol/L,菌密度OD600为1.0的条件下诱导4h所得蛋白量最大;经统计正交分析的最佳诱导条件为37℃、0.5mmol/LIPTG和菌密度OD600为1.0的条件下诱导7h。经实验验证,应用正交分析的最佳条件诱导所得目的蛋白量最大,但实际中通常采用诱导4h条件。实验证明正交试验可以用于基因工程菌株蛋白表达条件优化过程,提高工作效率。
- 陈思佳商庆龙王燕李晓波刘希君谷鸿喜
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1蛋白正交试验
