山东省教育厅科技计划项目(J08LF57)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：徐公义葛长城王海丽赵德明唐家琪更多>>
- 相关机构：聊城职业技术学院中国农业大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：山东省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪链球菌2型epf基因的原核表达及其蛋白纯化被引量：1
- 2009年
- 为了克隆、表达SS2菌株epf基因片段,分析蛋白活性,根据GenBank SS2epf基因序列设计引物,克隆epf基因片段并进行序列分析,构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有GST标签的融合蛋白rEF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白rEF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原。经Western blot鉴定,EF可与SS2多克隆抗血清发生特异性反应。
- 葛长城王海丽徐公义
- 关键词：猪链球菌2型原核表达蛋白纯化
- 猪链球菌2型胞外因子的融合表达及多克隆抗血清的制备
- 2009年
- 根据GenBank SS2(Streptococcus suis serotype 2,SS2)epf基因序列设计引物,克隆epf基因片段并进行序列分析,同时亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX4T-2上,将构建的原核表达质粒pGEX4T-2-epf导入大肠杆菌(Eacterium coli)TG1中,诱导融合蛋白EF-GST的表达。经亲和层析、凝血酶切割后,获得纯化的EF为抗原蛋白,用其免疫家兔制备抗血清,成功制备了EF蛋白及其特异的多克隆抗体,为进一步研究EF的功能提供了有用的工具。
- 葛长城王海丽徐公义
- 关键词：猪链球菌2型多克隆抗体
- 猪链球菌2型溶血素融合蛋白的制备及免疫活性测定被引量：3
- 2011年
- [目的]研究四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素（suliysin,sly）基因的克隆表达及融合蛋白生物活性分析。[方法]从sly中获取第230~593氨基酸残基区域的基因片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定,以重组pMD18-T/sly为模板PCR扩增基因片段,与表达载体pQE-30连接,转化至大肠杆菌TG1,重组子经PCR、酶切、测序鉴定。IPTG诱导重组蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白的抗原性。[结果]基因片段在大肠杆菌中得到了表达,表达的融合蛋白可被猪链球菌2型菌体ZY05719抗血清识别,具有抗原性。[结论]所克隆、表达的溶血素区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 王海丽徐公义葛长城赵德明
- 关键词：猪链球菌2型溶血素克隆抗原性
- 四川脑膜炎病例猪链球菌2型溶血素抗原表位富集区的原核表达被引量：2
- 2010年
- 对2005年四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素编码蛋白中包含多个抗原表位的第230-593氨基酸残基区域的基因片段进行扩增并克隆。基因片段经酶切处理后插入表达载体pQE-30的BamHⅠ和SalⅠ位点之间,构建融合表达质粒,转化宿主菌TG1经IPTG诱导后融合基因得到了表达,用猪链球菌2型菌体抗血清对表达的融合蛋白进行免疫印迹试验,分析融合蛋白的免疫反应性。试验结果提示该溶血素蛋白第230-593氨基酸残基区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定基础。
- 王海丽徐公义葛长城王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型溶血素抗原表位
