哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2013RFQXJ036)
- 作品数：2 被引量：17H指数：1
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- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- CRISPR/Cas9系统在植物基因组定点编辑中的研究进展被引量：16
- 2015年
- 当外源DNA通过转基因技术导入植物细胞后,会以同源重组或非同源重组两种不同的方式整合到基因组中,进而获得相应的目标性状。外源DNA与受体细胞序列相同或相近的位点发生重新组合,从而整合到受体细胞的染色体上称之为同源重组;当发生了DNA双链断裂的细胞为了避免DNA或染色体断裂而造成DNA降解或对生命力的影响,而强行将2个DNA断端彼此连接在一起时则为非同源重组。发生非同源重组的细胞其基因组常出现核苷酸片段的插入和/或缺失以及其他突变等多种情况,使得研究者无法得到精确控制的突变结果;而发生同源重组的细胞基因组序列通常不变,通过加入同源重组的供体DNA,可以实现对基因组的精确修饰和改造。由于在植物中产生自发同源重组的概率很低,对植物基因组进行精确修饰和改造非常困难,位点特异性核酸酶的出现和应用,大大提升了同源重组的效率,使基因组编辑变得更加高效和精确,从而使得对包括植物在内的任何物种进行基因组编辑都将成为可能。锌指核酸酶(ZFN)和TALE核酸酶(TALENs)是能够使DNA的靶位点产生DNA双链断裂进而实现基因组定点编辑的常用系统,但在具体应用中发现这两种系统存在着许多缺陷和不足,如脱靶效应、与基因组进行特异结合与染色体位置及邻近序列有关等,另外技术难度大、构建组装时间长也限制了其应用。CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌及古生菌中,是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。Ⅱ型CRISPR/Cas系统经过密码子优化等改造后已成为继锌指核酸酶ZFNs和TALENs后的新型高效定点编辑的新技术,具有突变效率高、制作简单、易操作及成本低的特点。目前,该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确编辑,编辑的类型包括基因的定点插入、小片段的缺�
- 解莉楠宋凤艳张旸
- 关键词：植物基因工程
- 羊草铁蛋白基因(LcFER)全长cDNA的克隆及原核表达被引量：1
- 2013年
- 羊草(Leymus chinensis)是东北地区盐碱地的乡土物种,蕴含着丰富且高效的抗盐碱特性相关基因。本试验利用RACE法从羊草中克隆了抗盐碱相关的铁蛋白基因(LcFER)的全长并进行了序列信息分析,并利用限制性内切酶BamHⅠ和XbaⅠ构建了重组质粒pGEX-KG-LcFER。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析表达产物。结果表明:羊草铁蛋白基因(LcFER)编码区为729bp,与小麦、大麦、水稻等铁蛋白基因同源性较高,包含铁离子结合位点、铁核中心和铁离子通道3个保守的功能域,与亲缘关系较近的小麦和大麦的FER蛋白的二级结构一致。重组质粒pGEX-KG-LcFER经酶切和测序证实构建成功后,SDSPAGE分析诱导表达的蛋白质,获得的目标蛋白相对分子量为27kD左右。此结果为进一步研究铁蛋白基因的功能提供基础。
- 刘鸣王江李玉花解莉楠
- 关键词：羊草原核表达
