浙江省医药卫生科学研究基金(2000A110)
- 作品数：11 被引量：77H指数：4
- 相关作者：陈力陶思丰杨小锋刘伟国郑秀珏更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院苏州大学附属第二医院浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省科技厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双层血管细胞种植提高人工血管内皮细胞粘附性被引量：4
- 2003年
- 目的 采用血管内皮细胞 (EC)和平滑肌细胞 (SMC)双层种植方法 ,提高人工血管腔面EC的保存率。 方法 聚四氟乙烯 (PTFE)人工血管经纤维连结蛋白预衬处理 ,管腔面先后种植SMC和EC ,将受试的人工血管接入脉冲式体外灌注装置灌注 1h ,计算比较灌注前后受试标本SMC和EC密度。 结果 灌注 1h后 ,单纯EC种植组 61%细胞脱落 ,单纯SMC种植组 3 6%细胞脱落 ,而双层细胞种植组仅有 2 7%EC脱落 ,双层细胞种植组细胞保存率明显高于单纯EC种植组 (P <0 0 1)。低流速预灌注未能改善EC的保存率。
- 陈力余红戴宁陶思丰龚渭华
- 关键词：人工血管血管内皮细胞种植平滑肌细胞
- 大鼠严重脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达被引量：18
- 2004年
- 莫纪华郑秀珏杨小锋
- 关键词：严重脑损伤基因BCL-2BAX
- 转基因血管内皮细胞的组织型纤溶酶原激活剂活性和种植黏附性研究
- 2003年
- 目的观察转基因血管内皮细胞 (endothelialcell,EC)的组织型纤溶酶原激活剂 (tissueplasminogenactivator ,tPA)活性和种植黏附性改变。 方法普通型和变异型tPA基因转染人大隐静脉EC ,ELISA法测定tPA活性。聚四氟乙烯人工血管腔面种植EC ,接入脉冲式体外灌注装置 1h ,比较EC保存率。结果普通EC组tPA活性为 (1 5± 1 0 )IU/ml,野生型和变异型tPA转基因组tPA活性分别为 (30 .0± 8.0 )IU/ml和 (14 1± 1 0 )IU/ml,转基因组均明显高于普通EC组 (P <0 0 1)。加入纤维蛋白后 ,变异型tPA组的tPA活性达 (5 0 .0± 19.0 )IU/ml,较加入纤维蛋白前(14 1± 1 0 )IU/ml明显提高 (P <0 0 1)。灌注 1h后 ,普通EC组EC保存率为 (45± 5 ) % ,野生型和变异型tPA组分别为 (39± 6 ) %和 (5 4± 13) % ,变异型tPA组高于普通EC组 (P <0 0 5 )。加入纤维蛋白后 ,变异型tPA组EC保存率下降至 (43± 8) % (P <0 0 1) ,但不低于野生型tPA组和普通EC组 (P >0 0 5 )。结论转基因内皮细胞tPA活性显著提高 ,变异型tPA的活性具特异性 ,有利于改善种植EC保存率。
- 陈力戴宁余红陶思丰王建伟许斌
- 关键词：转基因血管内皮细胞人工血管
- 聚四氟乙烯人工血管材料作为VEGF基因载体的可行性研究被引量：2
- 2007年
- 目的：探讨聚四氟乙烯（PTFE）人工血管携栽血管内皮生长因子（VEGF）基因并转染移植部位组织细胞的可行性。方法：将pCDI-hVEGF121，质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成细条，溴化乙锭（EB）标记，在紫外先下观察其吸附基因质粒的情况。将经质粒溶液处理的血管材料置于生理盐水，并于不同的时间检测溶液的吸光度，计算出溶液的VEGF基因质粒浓度，绘出体外释放曲线。将经质粒溶液处理的血管材料（基因组，n=24）和经白蛋白溶液处理的血管材料（对照组，拧=24）分别植入家兔左、右大腿肌肉，实验按不同的时间，经RT-PCR半定量检测移植血管材料周围骨骼肌中VEGF121 mRNA表达水平，Westernblot检测VEGF121蛋白表达。结杲：吸附了VEGF基因质粒的血管材料经EB标记后，在紫外光下呈蓝紫荧光。体外释放曲线显示0．5～4h基因释放较快，随后进入缓慢增长期，直至72h仍有基因的释放，但释放速率明显减慢。RT～PCR和Westernblot显示，PTFE埋植后第1天、1周、2周、4周、6周和8周的标本hVEGF121 mRNA相对于β-actinmRNA的表达量，分别为1．053±0．356、1．718±0．404、2．021±0．303、1．872±0．231、0．986±0．254和0．340±0．116；VEGF121蛋白相对表达量为0．328±0．088、1．019±0．105、2．249±0．203、2．036±0．079、1．670±0.132和0．636±0．107。结论：PTFE血管材料能携载VEGF基因质粒并进行骨骼肌的转染。
- 陶思丰陈力
- 关键词：聚四氟乙烯血管内皮生长因子类人工血管转染基因
- 新型假型逆转录病毒载体的构建被引量：4
- 2004年
- 目的 将疱疹性口炎病毒壳G糖蛋白(VSV-G)用于构建新型假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)。方法 利用三质粒系统一过性转染293T/17细胞,通过磷酸钙共沉淀法产生VSV-G/MuLV;一过性转染后的病毒上清转导包装细胞系293/GPC以产生VSV-G/MuLV生产细胞系。G418筛选未成功转导的细胞,经筛选后的293/GPG细胞生产VSV-G/MuLV;用病毒上清转染NIH3T3细胞,并采用G418克隆筛选法测定病毒滴度。结果 感染后的NIH3T3细胞在G418的筛选培养下,有大量克隆形成。经计数和计算,VSV-G/MuLV病毒上清滴度为6×106。结论 成功构建了VSV-G/MuLV;该型病毒转染效率高,可直接转导大多数细胞,在有效监控条件下,VSV-G/MuLV作为载体可用于基因治疗。
- 陈勇兵陈如坤陈力吴明施立杨文涛钱永跃
- 关键词：LV转导VSV逆转录病毒载体转染一过性
- 创伤性颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因表达的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨不同程度颅脑损伤后bcl-2、bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 将100只SD大鼠分为轻、中、重度损伤组和对照组 ,通过改进的Feeney自由落体损伤装置制作脑损伤模型 ,然后用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法以及免疫组织化学方法 ,对各组大鼠脑组织中的凋亡细胞和bcl-2、bax免疫反应阳性细胞进行检测和统计。 结果 各损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞标记指数 (LI)明显高于未损伤的对照组(均P<0.05) ,bcl-2、bax阳性细胞LI也有所增加 (均P<0.05) ,同时 ,各损伤组bax/bcl-2阳性细胞LI的比值均大于对照组 (均P<0.05) ;轻度、中度组与重度组之间各项指标的差别大多有显著性意义 ,损伤程度重者指标升高明显。结论 bcl-2和bax表达的比例对颅脑损伤后促进细胞凋亡可能起重要的调控作用 ,其表达水平与损伤程度成正比。
- 杨小锋朱永坚刘伟国吕世亭
- 关键词：创伤性颅脑损伤细胞凋亡相关基因表达
- 携载VEGF基因的聚四氟乙烯血管材料对内皮细胞生长的促进作用被引量：2
- 2006年
- 目的：研究聚四氟乙烯（PTFE）血管材料携载血管内皮生长因子（VEGF）基因并促进内皮细胞生长的可行性．方法：将pCDI-hVEGF121／pCDI质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成圆片，置于生理盐水中并于0．5，1，2，4，8，16，24，48和72h测定溶液的吸光度，计算出溶液的DNA浓度，绘出体外释放曲线．分离和培养人脐静脉内皮细胞，将内皮细胞种植到携带基因质粒的PTFE材料表面，在6，24，72和120h检测细胞增殖情况并用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量．结果：体外释放曲线提示在0．5～4h的这段时间内，质粒释放较快，随后进入缓慢增长期，直至72h仍有质粒的释放．在24，72和120h时间点，VEGF质粒组PTFE材料上的内皮细胞数和增长倍率都明显高于空质粒组材料（P〈0．05），在6，24，72和120h时间点，VEGF质粒组培养液的VEGF蛋白水平和增长倍率也明显高于空质粒组（P〈0．01）．结论：证实了PTFE材料携带VEGF基因转染内皮细胞并具有促进其生长的可能性．
- 陶思丰陈力许远田华李国刚陈健
- 关键词：聚四氟乙烯血管内皮生长因子类人工血管基因内皮
- 乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进被引量：11
- 2005年
- 目的 建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型。方法 通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60 min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞。结果 形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达 95%以上。结论 该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础。
- 陈勇兵陈如坤陈力吴明施立杨文涛钱永跃
- 关键词：乳鼠心肌成纤维细胞细胞培养免疫细胞化学染色
- 创伤性颅脑损伤后细胞凋亡状态与脑水肿、颅内压的相关性研究被引量：9
- 2005年
- 目的 探讨创伤性颅脑损伤后细胞凋亡与脑水肿及颅内压变化的相关性及其临床意义。方法 采用改进的Fenney法自由落体损伤模型 ,将 42只重型颅脑损伤的家兔分为两组 ,用TUNEL法计算凋亡神经细胞数 ,计算不同时期的脑组织含水量及检测颅内压的动态变化 ,并将细胞凋亡状态与脑水肿、颅内压进行相关性分析。结果 损伤组家兔脑组织凋亡细胞数及颅内压水平在创伤后 3d时达到一个较高水平 (P <0 0 1) ,而脑组织含水量在 1d时已经达到峰值 (P <0 0 1) ;通过相关性分析 ,在颅脑创伤的不同时期 ,细胞凋亡状态与脑组织含水量及颅内压之间存在正相关性 (P <0 0 5or 0 0 1) ;在总体 (n =3 6)相关性比较以及回归分析中发现 ,凋亡细胞数与脑组织含水量、颅内压存在相关性。结论 创伤性颅脑损伤后 ,随着脑水肿的加重 ,颅内压的进一步升高 ,细胞凋亡数也相应增加。减轻脑水肿、降低颅内压 ,可以减少颅脑损伤后的神经细胞凋亡 ,从而达到减轻继发性脑损害的作用。
- 杨小锋龚江标虞军胡未伟刘伟国沈宏吕世亭郑秀珏傅伟明
- 关键词：颅脑损伤脑水肿颅内压
- 聚四氟乙烯血管材料携带的血管内皮生长因子基因转染血管内皮细胞并促进其生长的可行性被引量：3
- 2006年
- 目的探讨聚四氟乙烯(PTFE)血管材料携载血管内皮生长因子(VEGF)基因转染内皮细胞并促进其生长的可行性。方法将pCDI-hVEGF_(121)/pCDI/pEGFP．质粒溶液处理过的PTFE人工血管修剪成圆片,置于生理盐水中并于不同的时间测溶液中DNA浓度,绘出体外释放曲线。分离和培养人脐静脉内皮细胞,将内皮细胞种植到携带上述质粒的PTFE材料表面,监测细胞增殖情况并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养液中VEGF表达量,荧光显微镜下观察表达绿色荧光蛋白的内皮细胞比率。结果体外释放曲线提示从0．5～4．0 h的这段时间内质粒释放较快,随后减缓,直至72 h仍有质粒的释放。在24、72、120 h,pCDI-hVEGF_(121)组PTFE材料上的内皮细胞数和增长倍率都明显高于pCDI/pEGFP组材料(P＜0．05),pCDI-hVEGF_(121)组培养液的VEGF水平明显高于p CDI/pEGFP组(P＜0．01),荧光显微镜下观察到pEGFP组内皮细胞内绿色荧光蛋白的表达。结论证明了PTFE材料能够携带VEGF基因转染内皮细胞并促进其生长。
- 陶思丰陈力施小宇陈健许远李国刚
- 关键词：聚四氟乙烯血管内皮生长因子
