河南省科技成果转化计划项目(122201110027)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李新生崔保安高文明李燕朱春平更多>>
- 相关机构：河南农业大学中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：河南省科技成果转化计划项目国家农业科技成果转化资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H3N2亚型SIV核蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2015年
- 【目的】克隆和表达H3N2型猪流感病毒(SIV)A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的核蛋白(NP)基因,为制备NP抗体和SIV基因工程疫苗奠定基础。【方法】提取SIV A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的RNA,用RT-PCR扩增NP基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体,构建重组表达载体,并将其转化入大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,同时考察IPTG不同浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和不同诱导时间(2,4,6,8h)对重组NP蛋白表达量的影响。【结果】克隆到1 512bp的NP基因,与预期的核蛋白基因大小一致,共编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了分子质量约60ku的重组核蛋白,其主要以包涵体的形式存在。IPTG不同诱导浓度和不同诱导时间对重组NP蛋白表达量的影响均较小。【结论】克隆和表达了H3N2亚型猪流感病毒的核蛋白基因。
- 朱春平李燕吴亚丽常婧竹刘琳高文明李新生
- 关键词：猪流感病毒核蛋白H3N2亚型大肠杆菌
- 鸡α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ基因的克隆和真核表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferaseⅠ,ST3GALⅠ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3GALⅠ基因的完整ORF区,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,进行PCR、限制性酶切和DNA序列分析鉴定。结果表明,ST3GALⅠ基因全长1029bp,测序结果同GenBank数据库收录的序列一致,无任何密码子缺失与突变,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上的目的基因大小方向均正确。本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ST3GALⅠ真核表达载体,为下一步的真核表达及对ST3GALⅠ基因的功能研究奠定了基础。
- 刘媛媛王俊亚张晓娟陈礼朋岳旭龙高文明李双亮崔保安李新生
- 关键词：禽流感病毒受体真核表达载体
- H3N2亚型SIV血凝蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2016年
- 【目的】制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的单克隆抗体,为SIV的鉴别诊断奠定基础。【方法】将A/swine/Henan/1/2010(H3N2)猪流感病毒初步浓缩后,免疫6周龄的BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与瘤细胞NS0融合,采用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,对杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体进行Western blot检验和抗原结合活性检测。【结果】经过3次有限稀释法克隆纯化,最终得到1株能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株,命名为1C10,经检测其腹水抗体效价为1∶51 200。单克隆抗体亚型鉴定结果表明,1C10为IgG1亚型,轻链类型为κ链。Western blot检测结果表明,这株单克隆抗体能与H3N2特异性结合,而且能特异性识别血凝素蛋白(HA),而不与H1N1亚型猪流感病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒发生交叉反应。【结论】制备获得1株抗猪流感H3N2病毒HA蛋白的单克隆抗体,可用于猪流感病毒鉴别诊断方法的建立。
- 周云飞朱春平李燕常婧竹崔保安李新生
- 关键词：H3N2猪流感病毒单克隆抗体
