国家自然科学基金(20875103)
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 相关作者：方瑾于敏陈航王洁王晓楠更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 抗人大肠癌单链抗体与绿色荧光蛋白融合基因的构建和表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体。方法将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a(+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌BL21中进行融合基因ND-1-scFv/GFP诱导表达。Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化,免疫印迹和荧光显微镜方法验证融合蛋白的表达。结果 ND-1scFv被克隆到表达载体pET28a(+)-GFP中,诱导表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量为58kDa。SDS-PAGE灰度扫描结果显示纯化后的蛋白纯度为90%,荧光显微镜检测显示,表达有目的蛋白的大肠杆菌BL21具有明显的绿色荧光。结论成功构建并表达融合基因ND-1-scFv/GFP,为该单抗的肿瘤特异成像研究奠定了基础。E.
- 陈航廖生俊王蒴方瑾
- 关键词：绿色荧光蛋白大肠癌
- 基于微流控芯片的温度梯度毛细管电泳检测大肠癌石蜡标本中K-ras基因突变被引量：2
- 2010年
- K-ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断,并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者,以实现肿瘤的个体化治疗.采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary electrophoresis,TGCE)基因突变检测系统,实现了对98例石蜡包埋大肠癌组织中K-ras基因突变的高灵敏度筛查,突变阳性检出率为47.96%,显著高于PCR产物直接测序的23.47%.克隆测序显示该方法至少能检测到2.08%的K-ras基因突变体.K-ras基因突变与临床病理学参数的关系分析显示,直肠癌中K-ras基因突变率明显高于结肠癌(P<0.05),而与年龄、性别、组织学类型和肿瘤分期等无显著相关性.该检测方法为肿瘤早期诊断和指导临床用药提供了一种灵敏度高、检测速度快、便于大规模筛查的有效手段.
- 张惠丹王晓楠周喆马倩方瑾
- 关键词：微流控芯片K-RAS基因突变大肠癌石蜡包埋组织
- miR-194-5p在微流控芯片筛选的肺癌间质表型亚系的作用被引量：2
- 2019年
- 目的分析肺癌间质表型亚系A3细胞中上皮间质转化(EMT)相关的miR-194-5p鉴定、分析及其靶基因功能富集的生物学过程和信号通路。方法使用微流控芯片筛选母系肺癌A549细胞获得间质表型亚系A3细胞,利用miRCURYTM芯片筛选差异性表达的miRNA。利用MTT、Transwell实验检测miR-194-5p对亚系细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。应用Miranda、MiRBase、TargetScan数据库和DAVID在线软件对miR-194-5p进行靶基因预测及相关信号通路、生物学功能富集分析。结果成功筛选获得具有间质表型亚系A3细胞,与母系A549细胞相比,在A3亚系中miR-194-5p的表达水平显著下调,转染miR-194-5pmimics后细胞迁移和侵袭能力发生显著降低但增殖未受影响;转染miR-194-5pinhibitor后细胞的迁移和侵袭能力增强。miR-194-5p的48个靶基因主要在蛋白质结合等生物学过程中起作用,信号通路显著富集于TGF-β等EMT相关信号转导通路。结论从微流控芯片获得的间质表型细胞亚系成功筛选EMT相关miRNA,其中miR-194-5p抑制肺癌EMT进程,是潜在的治疗靶点。
- 王洁于敏方瑾
- 关键词：上皮间质转化微流控芯片
- 基于双向浓度梯度的微流控芯片系统对肿瘤细胞侵袭能力的多重分析被引量：2
- 2019年
- 利用微流控芯片易于模拟体内生理环境、流体控制精确及易于集成等优势,将基于扩散原理的浓度梯度形成结构与经典的圣诞树形浓度梯度发生器相集成,建立了在垂直和水平方向上形成连续、双向浓度梯度的微流控芯片系统,采用该系统对不同类型细胞(HEK-293,MCF-7,SGC-7901)的侵袭力进行了定量分析;通过在垂直方向上施加血清浓度梯度,在水平方向上施加抗肿瘤药物十字孢碱浓度梯度,分析了在连续药物浓度作用下的人胃癌SGC-7901细胞侵袭能力被抑制的情况,同时观察并定量评价了伴随细胞侵袭力变化过程中细胞增殖能力受抑制的情况.研究结果表明,该系统可形成稳定的双向物质浓度梯度;在血清浓度梯度存在情况下,伴随十字孢碱浓度梯度的升高,肿瘤细胞侵袭(P<0.0001)和增殖能力(P<0.001)均呈现浓度依赖性的连续降低.建立的双向浓度梯度微流控芯片系统可用于评价复杂环境对细胞的多重影响,也为研究细胞间相互作用、多种药物联用及药物筛选等提供了良好的研究平台.
- 王洁张宇于敏方瑾
- 关键词：微流控芯片浓度梯度肿瘤药物筛选
- 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A的克隆表达及血清学分析被引量：2
- 2013年
- 目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,GSTrap FF亲和层析纯化出具有生物活性的NspA融合蛋白。采用纯化得到的NspA融合蛋白检测流脑恢复期患者血清中的抗NspA抗体。结果成功表达了功能性NspA蛋白,相对分子质量(Mr)为44 000。并用NspA融合蛋白检测到患者恢复期血清中存在有抗NspA抗体,且滴度为1∶40时,阳性率为90%。结论成功表达了NspA重组蛋白,并检测到自然感染流脑患者恢复期血清中的NspA抗体。
- 陈航方瑾
- 关键词：脑膜炎奈瑟氏菌血清学分析
- 超抗原葡萄球菌肠毒素与抗人大肠癌单链抗体ND-1 scFv融合基因的构建、表达及活性分析
- 2012年
- 目的:构建并表达超抗原葡萄(SEA)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,以提高SEA的靶向杀伤作用。方法:构建超抗原SEA和鼠抗人大肠癌单链抗ND-1scFv的融合基因ND-1 scFv/SEA的表达载体,转化到大肠杆菌E.coli M15中进行诱导表达。Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化。间接免疫荧光法检测融合蛋白的靶向结合活性,MTT法检测靶向杀伤效率。结果:成功构建了融合基因ND-1scFv/SEA,实现功能性表达,纯化的ND-1scFv/SEA融合蛋白与表达有ND-1相应抗原的大肠癌细胞CCL-187有高度亲和活性,通过激活外周血单核细胞,可特异性杀伤靶细胞,在4μg/mL浓度下对CCL-187的杀伤率达到91%,明显优于SEA的杀伤活性。结论:融合蛋白ND-1 scFv/SEA对大肠癌细胞CCL-187具有靶向结合和杀伤活性,为SEA用于靶向性的大肠癌治疗奠定了基础。
- 陈航李莉方瑾
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A大肠癌
- 应用微流控芯片富集循环肿瘤细胞的发展现状及展望被引量：1
- 2013年
- 循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTCs)存在于肿瘤患者的外周血中,与恶性肿瘤的转移、预后评价以及临床的个体化治疗均密切相关。相比于组织活检,CTCs的检测仅需抽取静脉血即可进行,因而具有取样简单、可重复性、无创等优点。CTCs的富集方法有很多,近年来兴起的微流控芯片分选技术具有高通量、低消耗、可集成等特点。基于CTCs的物理性质和生物性质所设计的不同芯片在分选速度、效率、纯度以及细胞活性保持方面各有优势,本文将对此加以重点阐述。
- 臧彬于敏方瑾
- 关键词：循环肿瘤细胞微流控芯片个体化治疗CELL肿瘤患者恶性肿瘤
