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AtchyB基因过表达对转基因洋桔梗抗氧化性的影响被引量：3: 2014年; 由转β-胡萝卜羟化酶(AtchyB)基因的洋桔梗获得T1代转基因系,经PCR及northern blot技术检测后,对L8和L25两个转基因系及野生对照进行UV-B紫外胁迫处理.检测胁迫前后植株的类胡萝卜素、氧化酶(SOD、POD、CAT)和MDA及光合作用相关参数值.对比结果表明:1胁迫使得基因表达水平强化,转基因系中与抗氧化性相关类胡萝卜素显著高于对照,叶黄素循环池显著放大;2酶促系统对非酶促系统产生影响,使得转基因系与对照间的酶活力存在差异,和对照比,转基因系的SOD对紫外胁迫更敏感,但MDA无显著差异,这可能是两种系统协调作用的结果;3胁迫后,转基因系Fv/Fm和ΦPSⅡ值显著高于对照,体现出其更强的抗氧化性.qP值显示AtchyB基因过表达对洋桔梗光化学猝灭影响不大,其中L25的NPQ显著高于对照,可见其非光化学淬灭能力有所提高.; 季静杨海兰王罡武卫党金超吴疆; 关键词：类胡萝卜素抗氧化性

chyb基因的玉米遗传转化及后代性状分析被引量：2: 2016年; 采用"成熟胚原位转化法"用带有质粒p Cambia2300-Lcchyb-bar的根癌农杆菌C58,侵染玉米芽尖生长点,将chyb基因转入玉米优良品系7922中。T0代植株不进行筛选,T1代植株用浓度为250 mg/L草铵膦筛选,存活植株进行PCR和RT-PCR检测,T1代获得24株阳性植株。T2代植株用500 mg/L草铵膦筛选,PCR阳性植株HPLC分析结果表明转基因植株总类胡萝卜素含量较野生型显著提高,其中玉米黄质含量提高了55.81%。转基因玉米叶片净光合速率明显高于野生型。本研究初步证明目的基因chyb已经成功整合到玉米基因组中,为进一步验证chyb基因在玉米中的功能,以及通过基因工程获得高品质的玉米种质资源奠定基础。; 谢超季静王罡史利平张烈尹日晖关春峰金超陈玉春; 关键词：玉米类胡萝卜素

过表达枸杞LmPSY基因提高洋桔梗抗逆性的研究被引量：5: 2015年; 类胡萝卜素与植物的光保护及耐盐有很大关系，八氢番茄红素合成酶（PSY）是类胡罗素合成重要酶．将来自枸杞（Lycium chinenseMiller）的八氢番茄红素合成酶（LmPSY）基因在洋桔梗中过表达，旨在提高其抗逆性．RT-qPCR 结果发现 LmPSY 基因在转基因洋桔梗中有组织差异表达．高效液相色谱结果说明转基因洋桔梗叶片总类胡萝卜素提高1.3倍，玉米黄质和叶黄素含量提高1.1倍．强光胁迫条件下，转基因洋桔梗鲜重和干重较非转基因植株有显著提高．200,mmol/L 氯化钠胁迫条件下，转基因洋桔梗过氧化物酶（POD）和超氧化物酶（SOD）含量有显著提高，转基因植株的荧光参数（Fv/Fm）提高8.0%～9.3%．强光和盐胁迫条件下对转基因植株生理生化指标的测定证明洋桔梗的耐强光性及耐盐性有显著提高．; 季静曹海燕王罡柳洁李招娣武卫党; 关键词：洋桔梗耐盐性

过表达枸杞LcCHYB基因提高洋桔梗抗氧化性的研究被引量：3: 2015年; 非生物胁迫造成植物胞内产生大量活性氧ROS和自由基,导致植物细胞结构及酶系统受到破坏。类胡萝卜素是植物胞内重要的抗氧化物质,与植物的抗氧化功能有重要关系。为了提高洋桔梗的抗氧化性,将来自枸杞(Lycium Chinense Miller)的β-类胡萝卜素羟化酶基因(Lc CHYB)导入洋桔梗中,研究结果表明以10%过氧化氢胁迫洋桔梗叶片20 min后,转基因洋桔梗叶片中总类胡萝卜素、玉米黄质含量及叶黄素循环池容量显著提高,同时对光合荧光参数和抗氧化酶系统的酶活性也进行探讨,发现转基因洋桔梗相对于野生型植株对氧化胁迫的耐受性也有了显著的提高。; 金超柳洁季静王罡曹海燕吴疆; 关键词：洋桔梗氧化胁迫

枸杞紫黄质脱环氧化酶(LcVDE)基因的克隆和分析: 2014年; 目的:克隆枸杞VDE基因的全长cDNA,通过对基因序列的生物信息学分析预测表达产物的结构特征和功能位点并验证其功能,为研究枸杞紫黄质循环的作用机理打下基础。方法:利用cDNA末端快速扩增和RT-PCR方法克隆枸杞VDE基因全长cDNA序列,生物软件分析VDE的生物学信息。构建VDE基因的原核表达载体pET-VDE,转化大肠后用IPTG诱导VDE过量表达;并构建体外反应体系对VDE表达蛋白酶功能进行验证。结果:LcVDE基因的ORF长1 413bp,编码的蛋白由470个氨基酸组成,分子量为53.61kDa,等电点为5.77。SDS-PAGE电泳结果表明,枸杞VDE基因在大肠杆菌中得到了过量表达。克隆基因表达蛋白进行紫黄质的脱环氧化反应,吸收光谱和HPLC的分析结果表明,表达蛋白催化了紫黄质的脱环氧化反应。结论:克隆得到的VDE基因编码的蛋白具有紫黄质脱环氧化酶的的功能与活性。; 张旭强季静王罡钟影刁进进关春峰吴疆金超; 关键词：枸杞

玉米氰化物解毒基因β-CAS和NIT在非生物胁迫下的表达与生物学效应: 2015年; 氰化物(cyanide)对生物有机体和环境都有剧毒.在非生物胁迫条件下,植物细胞内会产生大量的氰化物,这些氰化物对细胞具有毒害作用,基因β-CAS和NIT是玉米细胞氰化物解毒途径上的重要基因.本研究分别以200,mmol/L Na Cl胁迫条件下第2,h、8,h、24,h和48,h的天塔5号(F1)及其亲本三叶期的幼苗作为实验材料,对其光合速率、生长势、叶片氰化物含量及氰化物解毒途径重要相关基因β-CAS和NIT的表达量进行了检测和统计学分析.研究结果表明,F1代的根长显著长于亲本;在盐胁迫处理下,三系叶片的光合速率均发生下调,其中F1的光合速率和母本没有显著差异,但是显著高于父本;F1叶片的氰化物含量比母本和父本更早发生下降;三系的基因β-CAS表达量均上调,上调幅度从大到小的顺序依次是母本、F1和父本;F1和母本的NIT基因表达量下调,父本则发生上调.; 季静柳洁王罡杜希龙曹海燕荣非金超; 关键词：玉米氰化物实时定量PCR 非生物胁迫

LmAPX基因在大肠杆菌和酵母菌中的表达研究: 2014年; 目的:研究枸杞抗坏血酸过氧化物酶基因(ascorbate peroxidase,LmAPX)在原核中的表达和酶学特性以及在酵母菌中的抗氧化能力,为进一步研究逆境诱导的抗氧化胁迫的作用机理奠定理论基础。方法:将LmAPX转入大肠杆菌BL21中进行异源表达,采用Ni2+亲和层析,纯化重组蛋白,并对不同温度和pH值下的酶活进行研究,Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax值。将LmAPX转入酵母菌株W303中进行H2O2和NaCl氧化胁迫处理。结果:该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和6.5。当抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)浓度过量时,对H2O2的Km和Vmax分别是0.17±0.02 mmol/L和11.78±1.88 mmol/min·mg;当H2O2浓度过量时,对AsA的Km和Vmax分别是2.19±0.40 mmol/L和58.82±3.51 mmol/min·mg。含有LmAPX基因的酵母菌株,在半乳糖的诱导下在8 mmol/L H2O2和100 mmol/L NaCl的培养基上的生长都明显优于对照组。结论:LmAPX蛋白具有很好的抗氧化性和耐盐性。; 高海伶季静王罡吴广霞荣非关春峰金超; 关键词：酶学分析氧化胁迫

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国家科技重大专项(2014ZX08003-002B)