公共文化服务平台

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：2: 2014年; 将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。; 王爱华许可军王金良魏凤孙全文; 关键词：猪瘟病毒单克隆抗体

非洲猪瘟病毒VP73结构蛋白表达及鉴定: 2013年; 为获得可作为血清学诊断抗原的体外诱导表达ASFV VP73结构蛋白,根据Gen-Bank登录的ASFV基因序列,人工合成VP73主要抗原表位区基因克隆至pUC57载体中,设计1对引物,PCR扩增获得429nt的VP73基因片段;将VP73基因片段使用EcoRI和SalI酶切后亚克隆至表达载体pGEX-KG,经PCR、酶切、测序鉴定挑选阳性克隆,转化进表达菌株BL21(DM3)中进行体外诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达及其活性。结果显示,成功构建表达重组载体pGEX-KG-VP73,且诱导有效表达了41Ku重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白的35%;Western blot分析表达该蛋白具有良好的表达活性。试验为建立无感染性、快速、敏感的血清学诊断方法奠定了一定基础。; 董林王艳萍张春玲沈志强; 关键词：非洲猪瘟病毒

杂交猪IFN-γ和IL-18双基因在Rosetta TM大肠杆菌的表达被引量：1: 2013年; 依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别。本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础。; 王金良孙翠平谢金文祖立闯魏凤董炳梅沈志强; 关键词：IFN-Γ基因 IL-18基因杂交猪

采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究被引量：11: 2012年; 为建立一种能够区分猪瘟病毒(CSFV)强毒与弱毒疫苗C株的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法,本研究对GenBank中登录的25株CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗C株全基因组序列进行比较分析,设计一对共用下游引物以及分别针对CSFV强毒株与弱毒疫苗的特异性上游引物,其Tm值分别为84.5±0.5℃和88.5±0.5℃,熔解曲线分析显示为单特异峰。检测结果显示本实验建立的鉴别CSFV强毒感染与弱毒疫苗的荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法特异性强,对其他相关病毒无特异性扩增;敏感性高,最低检出量为5×RID50的细胞疫苗基因组拷贝;重复性好;并且扩增效率高、线性范围广、检测时间短,可对免疫猪群中CSFV强毒感染做出快速准确的鉴别检测,为有效防制猪瘟提供依据。; 谢金文李安肖跃强王金良李峰沈志强崔言顺; 关键词：猪瘟熔解曲线

猪瘟病毒E2基因原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立被引量：9: 2011年; 猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性的致死传染病。其病原体猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）中的成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒。E2蛋白是猪瘟病毒的跨膜结构蛋白,是诱导被感染动物机体产生免疫保护与CSFV中和抗体的主要病毒结构蛋白，; 谢金文李娇董林祖立闯王金良高三阳沈志强; 关键词：猪瘟病毒原核表达 E2基因病毒结构蛋白正链RNA病毒黄病毒科

猪瘟强毒与疫苗毒鉴别检测方法的研究进展被引量：3: 2012年; 猪瘟弱毒疫苗在我国的大规模免疫应用,对预防和控制猪瘟起到了重要作用,但同时使CSFV野毒感染猪和疫苗接种猪的鉴别诊断变得非常困难和必要。本文就猪瘟强毒与疫苗毒的鉴别诊断方法作一综述,以期为猪瘟的诊断与防控提供合理的科学依据。; 祖立闯谢金文唐娜苗立中李峰王金良沈志强; 关键词：猪瘟强毒

猪瘟病毒E2基因主要抗原区的克隆及其原核表达被引量：1: 2012年; 为研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点,试验参照猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计、合成了1对引物,应用RT-PCR方法扩增出长为786 bp的基因片段,命名为zE2,将zE2基因克隆到原核表达质粒pET 32a中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达,大肠杆菌菌体裂解产物再经SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为48 ku,主要以包涵体形式存在,且具有一定的免疫学活性。; 谢金文王金良董林苗立中管宇高三阳沈志强; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白克隆原核表达

猪瘟病毒常用实验室诊断方法概述被引量：3: 2013年; 近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了新的变化,转变为隐性感染和亚临床感染,出现了所谓"非典型猪瘟"、"温和型猪瘟"和"带毒母猪综合征",给兽医临床诊断增加了难度。随着分子生物学与现代免疫学技术的发展进步,猪瘟的分子生物学和血清学诊断方法不断完善。本文就近年来猪瘟的病毒分离鉴定、RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫技术等实验室诊断方法的最新研究进展以及各种检测方法的优缺点进行全面论述,旨在为实验室及养殖户寻找和建立适合自己的快速、准确的检测方法提供参考。; 李娇谢金文唐娜王金良苗立中沈志强; 关键词：猪瘟病毒

PPA-ELISA检测试剂盒在猪瘟抗体临床监测中的应用: 2013年; 近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚临床感染，临床表现也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高死亡率的急性症状，又有持续感染的温和性症状，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，病理剖检也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来很大困难。尽管血清学抗体检测方法很难有效区分疫苗毒与野毒产生的抗体，但由于其具有使用方便、一次检测量大和血清容易保存等优点而被广泛应用，在猪瘟流行状态监测和流行病学调查等方面有着重要作用，也是免疫猪群抗体水平监测的主要方法，对疫苗免疫效果评价及免疫程序的制定均具有重要意义词。本研究应用猪瘟病毒PPA—ELISA抗体检测试剂盒对436份免疫猪血清样品进行检测，旨在了解猪瘟的疫苗免疫效果，合理指导猪瘟的防疫，为猪瘟的综合防控提供参考。; 祖立闯谢金文王金良苗立中李峰沈志强; 关键词：ELISA检测试剂盒猪瘟抗体亚临床感染 PPA 非典型猪瘟

兔出血症病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1: 2014年; 为了建立兔出血症病毒(RHDV)快速、敏感的检测方法。本研究利用RT-PCR技术扩增出RHDVVP60基因中201bp的保守序列,并克隆到p MD18-T载体中作为标准品制作标准曲线,建立了RHDV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达6×101拷贝,与兔水疱性口炎病毒和轮状病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性。结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床RHDV的检测。; 于新友李天芝王金良沈志强; 关键词：兔出血症病毒 VP60基因 SYBR

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

山东省自然科学基金(ZR2010CQ012)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

山东省自然科学基金(ZR2010CQ012)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈