国家自然科学基金(30771890)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 乙型肝炎病毒核心启动子下游克隆入Teto序列后其在不同细胞系中转录活性的变化
- 2010年
- 目的:探讨将Teto序列克隆入乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)下游后对该启动子在不同细胞系中转录活性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8中扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T/Simple中,测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp萤光素酶报告基因质粒中Cp启动子的下游,以构建质粒pGL3-Basic/Cp/x7t。将能表达TetR的质粒pTL-8的萤光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/Cp/x7t共转染肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系HeLa、绿猴肾细胞系COS-7、乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双萤光素酶检测系统检测萤光素酶在这些不同细胞系中的活性,以分析将Teto序列克隆入乙型肝炎病毒核心启动子下游后对Cp在不同细胞系中转录活性的影响。结果:构建了质粒pGL3-Basic/Cp/x7t,将其转染HeLa、COS-7、HepG2、MDA-MB-231和HT-29细胞后其相对萤光素酶活性分别为56.14、171.52、211.03、6.11和34.24。结论:将Teto序列克隆入Cp下游并不能明显提高Cp的转录活性,而且破坏了Cp的组织特异性转录活性。
- 易军雷俊川宫卫东赵亚姜河刘忠湘王岭
- 关键词：核心启动子乙型肝炎病毒萤光素酶
- 四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子活性及组织特异性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:分析四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)活性及组织特异性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp荧光素酶报告基因质粒中Cp启动子的上游,以构建质粒pGL3-Basic/7t/Cp。将能表达TetR的质粒pTL-8的荧光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/7t/Cp共转染肝癌细胞系HepG2,宫颈癌细胞系HeLa,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以鉴定四环素调控系统对Cp活性及组织特异性的影响。结果:成功构建了质粒pGL3-Basic/7t/Cp,将其转染入不同组织来源的细胞系后表明将7个teto序列克隆入Cp上游后增强了Cp在各细胞系中的活性。结论:四环素调控系统明显增强了Cp的转录活性。但同时,Cp失去了其组织特异性的特点,即在这些细胞系中均有较强活性。
- 雷俊川宫卫东赵亚姜河刘忠湘易军
- 关键词：CP荧光素酶
- 乙型肝炎病毒核心启动子的克隆及其组织特异性的鉴定
- 2010年
- 目的克隆adr亚型乙型肝炎病毒核心启动子(core promoter,Cp)并鉴定其在肝细胞系的特异性表达。方法利用PCR从质粒pUC19/3HBV扩增adr亚型乙肝病毒核心启动子,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后再亚克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体。将重组载体pGL3-Basic/Cp分别转染肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系Hela、绿猴肾细胞系COS-7、乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以确定所克隆的基本核心启动子是否具有肝细胞特异性活性。结果从HBV基因组中成功克隆了Cp,Cp在肝细胞系中具有明显的活性,而在其他组织来源的细胞系中几乎没有活性。结论克隆得到的核心启动子具有明显的肝细胞特异性活性。
- 雷俊川宫卫东赵亚姜河易军
- 关键词：荧光素酶
