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一株马立克氏病毒miRNA缺失株的构建及鉴定: 马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(MDV)引起的T淋巴细胞增生性疾病。为研究MDV编码的miRNA与致瘤性的关系,本研究通过同源重组的方法构建了一株缺失mdv-miR-M9、-M5和mdv-miR-M12的重组MDV,...; 杨文闯刘长军张艳萍张锋侯广玉丛锋许娜娜; 关键词：马立克氏病毒 MIRNA 致瘤性; 文献传递

马立克氏病病毒miRNA缺失株的构建及其体外生长规律: 2011年; 为了研究马立克氏病病毒(MDV)编码的miRNA与致瘤性的关系,采用同源重组的方法构建了1株缺失MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的重组MDV,命名为rMS△miR9-12。经PCR和测序分析鉴定,证实该重组病毒编码MDV1-miR-M9、MDV1-miR-M5和MDV1-miR-M12的基因片段已缺失。将纯化后的病毒在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,对第10代和第20代进行PCR鉴定,证明该重组病毒的遗传性状稳定。用荧光定量PCR方法比较重组病毒rMS△miR9-12与原始毒株MS的体外生长规律,发现rMS△miR9-12株比MS株有更快的生长速度。重组病毒rMS△miR9-12的获得为下一步研究MDV编码的miRNA与致瘤机制关系提供了一个新的平台,同时为获得免疫原性较好的疫苗候选毒株提供了新的途径。; 杨文闯刘长军张艳萍李志杰张锋侯广玉丛锋; 关键词：马立克氏病病毒 MIRNA 致瘤性

三株鸡马立克氏病病毒流行毒株基因组重复区的序列测定及分析被引量：2: 2011年; 对国内3株马立克氏病病毒血清1型(Marek’s disease virus type 1,MDV-1)流行毒株的基因组重复区进行序列测定及分析,并与GenBank中登录的MDV-1参考毒株序列进行比较。结果显示,3株毒株的基因组重复区序列具有较高同源性,在进化上属于一独立分支。3株毒株的长重复区长度约为12kb,预测的开放阅读框(ORF)分别为43、40、43个;短重复区约为12kb,预测的ORF分别为27、25、26个。3株毒株的多个ORF中存在它们特有的共性氨基酸突变,是国内MDV-1流行毒株的特有的遗传性特征。该研究为我国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。; 许娜娜刘长军张艳萍李志杰侯广玉张锋丛锋杨文闯成云; 关键词：马立克氏病病毒

缺失部分miRNA的重组马立克氏病病毒致病性研究被引量：2: 2011年; 马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的T淋巴细胞增生性疾病。为了研究MDV编码的miRNA与致瘤性的关系,通过对缺失部分miRNA的MDV-MS毒株进行动物感染试验,并将其结果与MDV-MS强毒株的致病性的试验结果进行比较。结果表明:缺失miRNA的重组MDV对无特定病原体(SPF)鸡无致病性,而接种MDV-MS毒株的SPF鸡却显示出很强的MD典型症状。此结果证实MDV编码的miRNA对MDV的致瘤性起到重要的作用。另外,通过对重组MDV感染鸡的羽髓病毒载量的动态检测,发现此处编码MDV-miRNA的基因为复制非必须区,但重组病毒rMS△miR9-12比亲本病毒MDV-MS的体内复制能力有所下降。; 杨文闯刘长军刘芳萍赵洪海; 关键词：马立克氏病病毒 MIRNA

鸡马立克病毒HC135分离株的致病性研究: 辽宁省某鸡场疑似发生鸡马立克病,从发病鸡外周血淋巴细胞中分离到一株马立克病毒(MDV),经蚀斑克隆和细胞传代,成功培育了1株增殖性能稳定的MDV细胞毒株,命名为:HC135株。将HC135株第4代细胞培养物分别人工感染非...; 张艳萍刘长军; 关键词：马立克病毒 MEQ基因分离毒株; 文献传递

马立克氏病病毒感染鸡羽髓上皮细胞差异蛋白质组学研究被引量：2: 2011年; 为鉴定鸡羽髓上皮细胞感染马立克氏病病毒(MDV)前后差异表达的蛋白,本研究以MDV强毒GA株人工感染SPF鸡,并通过双向电泳技术进行分析。结果显示:在病毒感染后4 d、7 d、14 d和21 d显著差异表达的蛋白点分别有2个、8个、25个和9个;而通过质谱技术鉴定出29种蛋白质,其中包括能量代谢相关蛋白、增殖和凋亡相关蛋白、细胞骨架蛋白、信号传导蛋白、转录相关蛋白、免疫相关蛋白和其他功能蛋白质。本实验首次对鸡羽髓上皮细胞感染MDV后各时期蛋白表达水平的变化进行研究,鉴定了多种差异表达蛋白质,为进一步揭示MDV与宿主的相互关系、感染性病毒粒子的成熟和致病机制提供了依据。; 丛锋刘长军张艳萍李志杰张锋成云杨文闯许娜娜; 关键词：马立克氏病病毒双向电泳蛋白质组学

马立克氏病病毒致弱毒株的致病性及致瘤相关基因序列分析: 2011年; 为培育及鉴定马立克氏病病毒(MDV)致弱病毒株,本研究将4株现地流行MDV强毒株(L-ZY、L-CZ、L-MS和L-SY株),在体外经CEF连续传代至110代,获得相应的4株高代次病毒株(L-ZYp110C、L-CZp110C、L-MSp110C和L-SYp110C株)。其中的L-MSp110C和L-SYp110C株对SPF鸡的致病性试验结果显示:以2×103 pfu和2×104 pfu的剂量接种1日龄SPF鸡,在试验期(12周)内试验鸡均没有引起马立克氏病病变;高代次病毒株在体外增殖能力增强,而在体内增殖能力显著低于亲本病毒株。与亲本病毒株基因序列比对发现:4株高代次病毒株病毒基因组中Meq和RLORF12基因均有不同程度的缺失和插入;132 bpr序列拷贝数均显著增加;其中3株病毒株的RLORF4基因存在大片段缺失。以上结果表明,MDV强毒株体外传代至110代后,病毒增殖能力和主要致瘤相关基因的遗传特性均发生了改变,致弱毒株的毒力已完全弱化。该研究为进一步筛选MD弱毒疫苗提供了实验依据。; 侯广玉刘长军张艳萍杨玉英张锋丛锋杨文闯许娜娜; 关键词：马立克氏病病毒致弱毒株特性分析

鸡马立克氏病病毒HC135分离株的致病性被引量：4: 2011年; 从辽宁省某鸡场疑似马立克氏病发病鸡外周血淋巴细胞中分离到1株适应鸭胚成纤维细胞生长的马立克氏病病毒(MDV),经蚀斑克隆和细胞传代,成功培育了1株增殖性能稳定的MDV细胞毒株,命名为HC135株;将HC135株第4代细胞培养物分别人工感染非免疫和不同疫苗免疫的SPF鸡,分析其对鸡的致病力,分离毒株攻毒对照组鸡的发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10);HVT疫苗及HVT/SB1双价疫苗对分离毒株的保护指数分别为22.2和40.0。结果表明,该毒株可以突破HVT疫苗和HVT/SB1双价疫苗的免疫保护,具有特超强毒株(vv+MDV)的特点;也证实了我国商品鸡群中存在vv+MDV毒株。同时比较了HC135株与14株参考毒株的Meq基因序列,发现其Meq基因的ORF内没有基因片段的插入或缺失,推导的氨基酸存在点突变,这种突变符合高毒力毒株的变异规律。; 张艳萍刘长军; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因分离毒株

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