国家自然科学基金(30771882)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省科技攻关计划更多>>
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- 日本血吸虫童虫cDNA文库的免疫筛选及其生物信息学分析被引量：1
- 2008年
- 目的筛选新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子,并对其进行生物信息学分析。方法以血吸虫病人血清筛选日本血吸虫15d肝期童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,将结果通过Internet送入NCBI GenBank进行同源性比较并利用蛋白质分析软件进行生物信息学分析。结果经3轮筛选,共获15个阳性克隆,对其进行测序,获得11个基因,其中5个为编码日本血吸虫线粒体的基因,1个为编码日本血吸虫肌球蛋白的基因,其他5个分别为编码SjCHGC05315、SjCHGC01371、SjCHGC04782、SjCHGC05166、SjCHGC09769的基因。结论从日本血吸虫肝期童虫cDNA文库中筛选到一批日本血吸虫基因,为血吸虫病新的诊断候选分子的研究提供了材料。
- 张云霞王晓楠张薇娜沈际佳
- 关键词：日本血吸虫童虫CDNA文库免疫筛选生物信息学
- 日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因功能的研究
- 2011年
- 目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分电击转染的童虫作体外培养,在培养后第1、3和5天以TRIzol法同时提取其总RNA和总蛋白。实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测Mago nashi基因和蛋白表达产物。电击转染的童虫注射入6只BALB/c小鼠体内,每鼠约1 000条,6周后取出虫体,盐酸卡红染色,在激光共聚焦显微镜下观察虫体内部各器官形态特征,测量虫体相关指标。结果在电击转染后的第1、3和5天,SjMago nashi dsRNA组目的基因的转录水平较阴性对照组分别下降了22%、69%和80%,蛋白质水平较阴性对照组分别下降了12%、39%和56%。激光共聚焦显微镜观察发现,SjMago nashi dsRNA组中的雄虫睾丸内有较多精子,呈泛雄性化表现,而雌虫的卵巢和卵黄腺无明显特征变化。与阴性对照组相比,SjMago nashi dsRNA组的雄虫的体宽、睾丸长和睾丸宽,雌虫的体宽、卵巢长和卵巢宽均明显缩小(P<0.05)。结论 SjMago nashi dsRNA可特异性抑制日本血吸虫靶基因及其编码蛋白的表达,SjMago nashi基因为日本血吸虫生殖相关基因,在生殖系统器官的正常发育中起一定作用。
- 张薇娜张鹏刘淼任翠平黄大可沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖双链RNARNA干扰
- Tsunagi蛋白调节日本血吸虫成虫生殖器官及虫卵的发育
- 目的鉴定日本血吸虫Tsunagi蛋白在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Tsunagi基因的双链RNA,将其电穿孔转染入日本血吸虫童虫体内。电转后部分童虫进行体外培养,于培养后第1、3、5天收集童虫,提取童...
- 任翠平张鹏张薇娜刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖生物学蛋白质功能
- 文献传递
- 日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定
- 2011年
- 目的获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定。结果该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性。结论获得日本血吸虫Nanos蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。
- 赵前峰陈红霞任翠平刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫原核表达
- CARex和PTDtat基因重组5型腺病毒的包装及鉴定
- 2013年
- 目的分别构建和包装携带CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因的重组腺病毒。方法采用基因重组技术将CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因克隆在腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,经过Pme I线性化后转化BJ5183感受态细胞,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,构建重组腺病毒质粒pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat,然后转化DH5α感受态细胞,大量制备重组腺病毒质粒,经过Pac I线性化后回收,在脂质体介导下转染293A细胞,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达来确定病毒在细胞内复制,当细胞发生病变时证明病毒包装成功。结果在293A包装细胞系中成功包装携带CARex、PTDtat、CARex和PTDtat基因的重组5型腺病毒,倒置荧光显微镜观察到明显的GFP表达,PCR检测表明包装病毒含有目的基因,半数培养组织感染量(TICD50)显示重组腺病毒具有较高的滴度。结论成功包装了pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat重组腺病毒,为进一步探讨CARex和PTDtat基因对腺病毒感染肿瘤细胞效率的影响奠定了实验基础。
- 陈红霞赵前锋周海胜刘淼任翠平沈际佳
- 关键词：CAREX同源重组重组腺病毒载体
- 日本血吸虫成虫生殖系统的激光共聚焦显微镜形态学观察被引量：3
- 2008年
- BALB/c小鼠经皮感染日本血吸虫尾蚴(40±2条/只)35d后剖杀,获取成虫,经固定、染色、脱色、脱水、透明和封片等处理制成整装玻片标本,用激光共聚焦显微镜观察。显微镜下日本血吸虫的整体形态以及雄虫生殖系统中的睾丸、贮精囊和生殖孔,雌虫生殖系统中的卵巢、卵黄腺、输卵管、卵黄管、受精囊、卵模、梅氏腺、子宫、雌性生殖孔以及虫卵等形态结构清晰。激光共聚焦显微镜技术可较好地观察日本血吸虫虫体各器官组织和细胞结构。
- 张薇娜黄大可张鹏任翠平王晓楠张云霞沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖系统细胞学
