国家自然科学基金(81172784)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李懿李建辉范丹丹汲振余施佳辰更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州市中心医院河南省疾病预防控制中心更多>>
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- 靶向survivin基因小干扰RNA设计及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:利用生物信息学技术预测设计特异抑制survivin蛋白表达的siRNA序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70,并观察对survivin蛋白表达的沉默效果。方法:依据NCBI数据库获得的survivin mRNA序列,利用Whitehouse,Sidirect和Rational SiRNA Design软件预测设计siRNA干扰序列,并利用BLAST分析干扰序列与人类全基因组的同源性;转染食管癌细胞KYSE-70,Western blot法鉴定蛋白表达。结果:初步预测出3条含21个核苷酸的survivin干扰序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70后survivin蛋白表达明显下降。结论:运用生物信息学技术可快速便捷预测出抑制survivin表达的siRNA序列,为研究survivin在食管癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 施佳辰李懿范丹丹李建辉安继辉汲振余
- 关键词：小干扰RNASURVIVIN基因食管癌
- 细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响
- 2014年
- 目的 探讨细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响.方法 将4.1R基因敲除型（4.1R-/-）和野生型（4.1R＋/＋）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分别以0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mmol/L浓度的5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）孵育,72、96、120、180、240mJ/cm2剂量的450 nm蓝光照射进行光动力处理,细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率;经不同浓度5-ALA孵育的细胞,以荧光分光光度法检测胞内光敏剂原卟啉的荧光强度;以1.00 mmol/L的5-ALA孵育细胞后激光共聚焦显微镜观察胞内产生的原卟啉在细胞中的定位;Western印迹法检测原卟啉合成限速酶亚铁螯合酶（FECH）与胆色素原脱氨基酶（HMBS）蛋白表达水平.结果 5-ALA光动力处理均能杀伤两种细胞,其杀伤作用与5-ALA的浓度、孵育时间及光照射剂量相关,但两者PDT杀伤效果不同.当1.00mmol/L的5-ALA孵育4.0h且光照射剂量为120mJ/cm2时,4.1R-/-MEF存活率显著高于4.1R＋/＋MEF[（46.9±7.1）％比（12.5±2.1）％,P＜0.001].5-ALA孵育细胞后产生的原卟啉分布于整个胞质中,但两种细胞中原卟啉的浓度不同,在1.00 mmol/L的5-ALA孵育4.0h时,4.1R＋/＋MEF内原卟啉荧光值显著高于4.1R-/-MEF（124.2±3.5比34.6 ±3.8,P＜0.001）.Western印迹结果表明FECH与HMBS在两种细胞中的表达水平差异无统计学意义.结论 蛋白4.1R的缺失造成细胞内原卟啉合成量降低,PDT效果下降,但并未影响ALA代谢过程,推测蛋白4.1R影响了5-ALA的跨膜转运,进而影响细胞内原卟啉的合成,最终影响了PDT杀伤效应.
- 范丹丹李懿李建辉宁姝威禹丽娜张立果范天黎杨小静裘一兵康巧珍汲振余
- 关键词：光化学疗法成纤维细胞胚胎
