国家自然科学基金(30870301)
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
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- 东北林蛙GSK3β基因荧光定量PCR引物筛选体系的建立被引量：2
- 2016年
- 为探究低温条件下东北林蛙(Rana dybowskii)肝脏中GSK3β基因表达量变化,需利用荧光定量PCR(Fluorescence quantitative real-time PCR)对GSK3β基因表达量进行检测,而在此过程中PCR引物的筛选直接影响到检测结果数据的准确性与真实性。本实验以东北林蛙为实验对象,基于本研究组前期获得的东北林蛙转录组数据库,并参考其他物种GSK3β基因,利用Beacon Designer 7软件设计了6对引物,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR技术,筛选出1对GSK3β基因荧光定量PCR引物(F-TCCTACATCTGCTCTCGGTA,R-ACATCTATGCTGGAGGTATAATCA),其扩增效率为E=99.3%、R^2=0.998,可用于东北林蛙GSK3β基因实时表达量的研究。
- 张宇巩珊珊柴龙会张晶钰肖向红
- 关键词：GSK3Β荧光定量PCR引物
- 特定微生物胁迫下东北林蛙（R.dybowskii）皮肤活性肽的选择性表达
- 本研究以东北地区两栖类代表物种东北林蛙（R.dybowskii）为试验对象,以大肠埃希氏菌（Ecoli）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）和蛙虹彩病毒（R.grylio virus,RGV）为特异刺激原胁迫东北林蛙,收...
- 肖向红申屠德君柴龙会杨淑静苗慧敏徐佳佳郭娜张晶钰
- 关键词：东北林蛙HPLC
- 文献传递
- 蛙虹彩病毒刺激下东北林蛙皮肤活性肽的表达变化
- 本研究以两栖类代表物种东北林蛙（Rana dybowskii）为试验对象,以蛙类易感病原微生物虹彩病毒（Rana grylio virus,RGV）为特异刺激原,经腹腔注射后收集其皮肤分泌物,SephadexG-50凝胶...
- 杨淑静肖向红苗慧敏柴龙会周旋张晶钰
- 关键词：东北林蛙虹彩病毒特异性表达
- 文献传递
- 电刺激后东北林蛙皮肤分泌物及其抗微生物肽组分的动态恢复被引量：1
- 2012年
- 东北林蛙皮肤分泌物排空后,在不同时间点收集其皮肤分泌物,分析皮肤分泌物及其中抗菌肽谱的动态恢复规律。结果表明:电刺激排空后的第0～21天时间范围内东北林蛙皮肤分泌物总量的恢复呈递增趋势;高效液相色谱显示不同时间收集的皮肤分泌物的组分差异不显著(P>0.05,n=5),但各组分恢复的时间并不同步;用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对恢复较快的2个组分峰成分进行抑菌试验,发现2组分均有较强的抑菌活性。用ESI-MS/MS对2组份进行质谱鉴定,确定其氨基酸序列。东北林蛙皮肤分泌物中抗微生物肽的恢复表达优先于其他多肽,该免疫防御策略可为东北林蛙在复杂环境中的生存提供保证。
- 肖向红马建章苗慧敏申屠德君张晶钰柴龙会
- 关键词：东北林蛙皮肤分泌物抗微生物肽环境压力适应性
- 低温胁迫对东北林蛙雄性成体GP、PEPCK比活性的影响被引量：6
- 2012年
- 采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法、蒽酮比色定糖法分别检测低温胁迫下东北林蛙血糖和肝糖原、肌糖原的含量,并通过6-磷酸葡萄糖脱氢酶偶联比色法、乳酸脱氢酶偶联比色法分别检测低温胁迫下东北林蛙肝脏、肌肉糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP)和肝脏、肾脏磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的比活性,以探讨低温对东北林蛙GP、PEPCK比活性的影响。结果表明:随着环境温度降低,东北林蛙血糖水平逐步升高,糖原含量逐步降低,与对照组相比,各低温组血糖升高极显著(P<0.01),而肝糖原和肌糖原含量降低极显著(P<0.01);与对照组相比,0℃组、-1℃组肝脏、肌肉组织GP比活性升高极显著(P<0.01),且肝脏、肾脏PEPCK比活性升高极显著(P<0.01)。说明低温胁迫促使东北林蛙糖原含量降低,糖原分解和糖异生限速酶比活性升高,进而血糖含量升高,提示血糖作为抗冻保护剂在东北林蛙冬眠中发挥重要作用。
- 李秀峰肖向红柴龙会张晶钰
- 关键词：东北林蛙冬眠糖原磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶
- 东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化被引量：1
- 2013年
- 目的:确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因的最佳诱导表达条件。方法:本研究将PCR合成的dybowskin-1ST基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-dybowskin-1ST诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,应用BMMY培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法,对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化,通过SDS-PAGE电泳分析和体外抑菌试验检测目的肽表达丰度。结果:最佳诱导条件:甲醇终浓度为0.5%、诱导时间为72 h、诱导温度为28℃,在此条件下表达产物SDS-PAGE电泳条带灰度值为117,抑菌环直径为28.16mm,可为规模化的抗菌肽表达提供参考数据。
- 崔绍鹏周旋朱熬肖向红张晶钰
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母
- 东北林蛙烂趾病病原菌的分离鉴定及药敏试验被引量：2
- 2014年
- 对东北林蛙烂趾病病原菌进行分离鉴定,并对其药物敏感性进行研究。结果表明:从东北林蛙患病趾处分离到1株溶血性致病菌,经16S rDNA序列分析法鉴定为嗜水气单胞菌。通过对23种抗生素的药敏试验表明,此菌对氟喹诺酮类(如环丙沙星、培氟沙星、诺氟沙星),部分头孢类抗生素(如头孢呋辛、头孢噻肟、头孢吡肟),β-内酰胺类抗生素(如亚胺培南、氨曲南)高度敏感;对部分头孢类抗生素(如头孢噻吩、头孢西丁、头孢他啶),氨基糖苷类抗生素(如卡那霉素、庆大霉素、链霉素)中度敏感;对青霉素类如(青霉素、苯唑西林、氨苄西林、阿莫西林)有耐药性。说明可以考虑用氟喹诺酮类、头孢类或β-内酰胺类抗生素防治东北林蛙烂趾病。
- 张建平肖向红柴龙会
- 关键词：东北林蛙嗜水气单胞菌药敏试验
- Rana dybowskii surface microbial and relationship with the habitat
- ＜正＞Objective:Global amphibian declines are a part of the current biodiversity crisis.Previous work have shown ...
- Jianping ZhangXianghong XiaoLonghui ChaiJingyu Zhang
- 关键词：HABITAT
- 文献传递
- 大肠杆菌胁迫下东北林蛙皮肤抗菌肽分泌特性研究被引量：2
- 2010年
- 以东北林蛙（Rana dybowskii）为试验对象,采用大肠杆菌（Escherichia coli）作为环境胁迫因子,通过RP-HPLC分析、抑菌活性和蛋白浓度比较,观察其皮肤分泌物的特异性分泌,以期揭示两栖类动物抵御环境微生物时皮肤分泌抗菌肽的变化规律。研究发现,用E.coli胁迫1~18d后皮肤分泌物粗提物洗脱峰数量明显减少了61.54%~84.62%,对4个持续出现的8、9、11和14号洗脱峰的抑菌活性试验显示,8、9号峰对G-和G＋菌均表现较强的活性抑制,而11、14号峰仅对G＋菌有较强的抑菌活性。此外,E.coli胁迫后第7天组皮肤分泌物的洗脱峰数量、持续出现峰的峰面积值及蛋白浓度与对照组比均明显增加,第23天组均恢复至较高水平。研究结果表明：两栖类皮肤抗菌肽可能在参与机体先天免疫系统防御和启动后天免疫应答的关键环节中发挥重要的桥梁作用。
- 徐佳佳肖向红柴龙会苗慧敏杨淑静
- 关键词：东北林蛙抗菌肽大肠杆菌胁迫反相高效液相色谱
- mRNA changes of Toll like receptors in Rana dybowskii skin under Rana grylio virus stress
- ＜正＞Object:Rana grylio virus stress Rana dybowskii,the genome RNA were extracted from Rana skin, sequenced the ...
- Xianghong XiaoLishu WuJingyu ZhangLonghui ChaiDandan WangShuijing Yang
- 关键词：SKINTLRS
- 文献传递
