国家自然科学基金(30771933)
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
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- 重组免疫毒素对同种小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用被引量：6
- 2008年
- 目的观察重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体小鼠皮肤移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响、移植后外周血T细胞亚群变化以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组小鼠皮肤存活时间延长(13.86±2.11)d,与空白对照组比较相差显著(P<0.01),且与hIL-2-Luffin P1的剂量呈正相关;而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,移植后外周血T细胞亚群活化程度减轻,病理显示hIL-2-Luffin P1处理组移植皮肤淋巴细胞浸润较轻。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制T细胞的异常活化,从而抑制免疫排斥反应,达到延长移植物存活时间的目的。
- 王儒鹏何威贺伟峰张小容刘树雷吴军
- 关键词：重组免疫毒素P1
- 重组免疫毒素hIL2-Luffin P1的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建、诱导表达并鉴定可用于特异性杀伤皮肤T细胞淋巴瘤的免疫毒素hIL-2-Luffin P1。方法采用基因工程技术将重组基因片段hIL-2-Luffin P1克隆入新的表达载体pET32a(+)中,经酶切及DNA序列测定进行鉴定并证实正确后,转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达hIL-2-Luffin P1融合蛋白,行Western blot用His标签抗体和鼠抗人IL-2抗体对该融合蛋白进行鉴定。结果成功构建了重组免疫毒素表达载体pET32a(+)-hIL-2-Luffin P1,经Western blot鉴定证实诱导表达的重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1融合蛋白的正确。结论重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1的成功构建为进一步研究其对皮肤T细胞淋巴瘤的杀伤作用奠定了实验基础。
- 刘树雷何威王儒鹏吴军张小容赵云
- 关键词：免疫毒素P1肿瘤靶向治疗
- 重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对大鼠肾移植存活时间的影响被引量：1
- 2008年
- 目的以人IL-2片段与植物毒素Luffin P1重组获得的免疫毒素hIL-2-Luffin P1,观察它对大鼠肾移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体大鼠肾移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响,以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组大鼠存活时间延长(13.86±2.11)d,与对照组比较相差显著(P<0.01);而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,病理结果显示对照组移植肾单位结构破坏,淋巴细胞浸润明显,而在同一时间hIL-2-Luffin P1处理组大鼠的移植肾脏病理变化较轻;T淋巴细胞亚群检测显示经hIL-2-Luffin P1处理后,受体外周血T细胞的活化程度降低。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制免疫排斥反应,延长移植物存活时间。
- 王儒鹏何威刘树雷贺伟峰张小容吴军
- 关键词：重组免疫毒素肾移植P1
- 重组免疫毒素hIL2-Luffin P1对Hut-78细胞增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察并评价重组免疫毒素hIL2-Luffin P1对皮肤T细胞淋巴瘤细胞(Hut-78)增殖和凋亡的影响。方法IL-2受体α链(CD25)抗体通过免疫细胞化学技术检测Hut-78细胞表面CD25分子的表达。将不同浓度hIL2-Luffin P1分别处理Hut-78细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,以Annexin V/PI双标法流式细胞术检测Hut-78细胞的凋亡。结果CD25在Hut-78细胞表面表达阳性率为79.32%。经浓度为0.5、1、10、20、30和40μg/mL的hIL2-Luffin P1作用48h,其对Hut-78细胞增殖的抑制率分别为11.03±1.604、19.21±1.577、32.41±1.744、42.37±1.289、52.80±2.031、59.33±1.261。经浓度为1、10、30μg/mL的hIL2-Luffin P1作用48h,Hut-78细胞的凋亡率分别为8.23±1.29、15.37士0.98和27.33±1.06。结论hIL2-Luffin P1能够抑制Hut-78细胞的增殖并能诱导凋亡。这提示重组免疫毒素hIL2-Luffin P1对具有IL-2受体表达的皮肤T细胞淋巴瘤可能具有潜在治疗作用。
- 刘树雷何威王儒鹏黎智吴军赵云胡小红
- 关键词：免疫毒素P1T细胞淋巴瘤细胞增殖凋亡
- Luffin P1-KDEL的构建、表达、纯化及鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的构建植物毒素Luffin P1的原核表达质粒PET32a(+)-Luffin P1,并对其进行诱导表达,以及表达蛋白的纯化及鉴定。方法采用基因工程技术将重组基因片段Luffin P1克隆到表达载体pET32a(+)中,经酶切及DNA序列分析正确后,转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达Luffin P1融合蛋白,并用His标签抗体对该融合蛋白进行Western blot鉴定,对鉴定正确的融合蛋白进行纯化,肠激酶酶切及再纯化。结果成功的构建了原核表达载体pET32a(+)-Luffin P1,获得了纯度较高的Luffin P1蛋白。结论通过基因工程合成Luffin P1蛋白是成功的,并为进一步对Luffin P1功能研究及制备免疫毒素的弹头鉴定了实验基础。
- 刘树雷何威王儒鹏吴军胡小红
- 关键词：免疫毒素核糖体失活蛋白P1
- 芳维A酸乙酯对体外培养小鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1分泌的影响
- 2010年
- 目的研究芳维A酸乙酯(AE)对体外培养小鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响。方法采用MTT法检测芳维A酸乙酯(AE)、全反式维A酸(atRA)对GMC增殖的影响;采用流式细胞仪检测AE干预后GMC的凋亡情况;采用ELISA法检测AE干预后GMC培养上清液中TGF-β1的含量。结果与正常组对比,AE干预组GMC增殖受到抑制(P<0.05),且当浓度在10^(-8)到10^(-5)mol/L范围内时,作用成剂量依赖性。AE能够诱导GMC的凋亡,正常组、10^(-7)mol/L、10^(-5)mol/L的AE干预组的GMC细胞凋亡率分别为(1.13±0.36)%、(9.52±0.99)%和(27.23±2.88)%。AE能够抑制GMC的TGF-β1分泌,与空白对照组,AE干预组TGF-β1表达降低(P<0.05)。AE抑制GMC增殖、诱导GMC凋亡及抑制GMC TGF-β1分泌的作用明显强于atRA。结论AE可以抑制体外GMC增殖并能诱导凋亡,其抑制增殖的作用可能与TGF-β1表达降低有关。AE可干预狼疮性肾炎病理病理进程。
- 杨娟何威王儒鹏
- 关键词：芳维A酸乙酯系膜细胞转化生长因子-Β1
- 芳维A酸乙酯对Hut-78细胞增殖及凋亡的影响
- 2011年
- 目的观察并评价芳维A酸乙酯对皮肤T细胞淋巴瘤细胞(Hut-78)增殖及凋亡的影响。方法用不同浓度的维甲酸分别处理Hut-78细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖的抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果经浓度为10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L的维甲酸分别作用于Hut-78细胞48 h,对细胞增殖的抑制率分别为(10.83±1.55)%、(17.71±3.60)%、(25.89±1.08)%、(30.92±1.86)%。用10-7 mol/L的维甲酸分别作用于Hut-78细胞12、24、36、48 h,其抑制率分别为(4.87±1.87)%、(10.87±0.77)%、(15.61±1.66)%、(19.57±1.80)%、(27.98±1.86)%。经浓度为10-7、10-5 mol/L的维甲酸作用48 h,Hut-78细胞的凋亡率分别为(11.56±1.51)%、(20.48±2.34)%。结论芳维A酸乙酯能够明显抑制Hut-78的增殖并能诱导细胞凋亡。
- 刘树雷何威王儒鹏
- 关键词：芳维A酸乙酯细胞增殖细胞凋亡
- 重组免疫毒素hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞体外增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的检测基因工程免疫毒素hIL-2-LuffinP1的体外生物学活性。方法采用分离的C57和BALB/c小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞反应,刀豆球蛋白A(ConA)刺激BALB/c小鼠脾细胞进行淋巴细胞增殖实验,以LuffinP1毒素分子作为对照。3H-TdR核素掺入法检测hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞增殖的抑制作用。以CTLL-2细胞检测hIL-2-LuffinP1对IL-2依赖细胞株的杀伤作用,实验共设6组:PBS、IL-2、LuffinP1、LuffinP1+IL-2、hIL-2-LuffinP1、hIL-2-LuffinP1+IL-2,CTLL-2细胞加入各组试剂培养12h,台盼蓝染色,计数每100个细胞中的死亡细胞数。结果随剂量增加,hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞增殖的抑制作用逐渐增强,在10-6mol/L浓度时,抑制率可达到97%,而LuffinP1对淋巴细胞增殖无明显抑制作用。hIL-2-LuffinP1对Con A刺激的脾细胞活化也有抑制作用,与在混合淋巴细胞体系中一致,而LuffinP1对上述两个反应体系中的淋巴细胞增殖均无明显抑制作用。加入hIL-2-LuffinP1+IL-2和hIL-2-LuffinP1后CTLL-2细胞的死亡率分别为29.6%和47.4%,明显高于IL-2组(5.6%,P<0.01)。结论重组免疫毒素hIL-2-LuffinP1在体外能够抑制淋巴细胞增殖,对表达IL-2R的活化淋巴细胞产生定向杀伤作用。
- 王儒鹏何威刘树雷贺伟峰张小容吴军
- 关键词：免疫毒素类
- 重组免疫毒素hIL2-Luffin P1联合维A酸对Hut-78细胞的影响
- 2011年
- 目的:评价重组免疫毒素hIL2-Luffin P1联合维A酸乙酯对皮肤T淋巴瘤细胞(Hut-78)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:将不同浓度hIL2-Luffin P1分别联合10^(-7)mol/L维A酸乙酯处理Hut-78细胞,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果:用浓度为0.5、1、10、20、30、40 μg/mL的hIL2-Luffin P1分别联合10^(-7)mol/L的芳维A酸乙酯作用Hut-78细胞48h,对Hut-78细胞的抑制率分别为21.33±1.65、28.30±2.42、40.58±1.69、51.57±2.54、63.15 4-2.41、72.45±1.76;用30 μg/mL的hIL2-Luffin P1联合10^(-7)mol/L芳维A酸乙酯分别作用于Hut-78细胞12、24、36、48 h,对Hut-78细胞的抑制率为26.96±1.91、38.05±1.64、51.22±0.57、64.30 4-2.19、72.48±2.23。经浓度为1、30μg/mL的hIL2-Lufifin P1分别联合10^(-7)mol/L的维A酸乙酯作用Hut-78细胞48h,细胞的凋亡率分别为15.94 ±1.66和34.89±2.11。经30μg/mL的hIL-2-Luffin P1联合10^(-7)mol/L的维A酸乙酯作用Hut-78细胞48 h,主要表现为G_1期细胞比例增加和S期减少。结论:hIL2-Luf-fin P1联合维A酸乙酯能够抑制Hut-78细胞的增殖及凋亡。
- 刘树雷何威王儒鹏
- 关键词：免疫毒素CTCL细胞增殖细胞周期
