广东省科技计划工业攻关项目(2008B050100008)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：陶谦吕标郑超群乔彬陈之锋更多>>
- 相关机构：中山大学中山市人民医院江门市口腔医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hTERT诱导永生化口腔黏膜上皮细胞株的建立被引量：5
- 2013年
- 目的:转染外源性人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因建立永生化口腔黏膜上皮(oral mucosal epithelial,OME)细胞株。方法:利用反转录病毒载体将外源性hTERT基因转入OME细胞,G418筛选出抗性细胞克隆后,进行免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)鉴定细胞来源、细胞形态学观察、细胞增殖动力学研究、裸鼠成瘤实验以及hTERT基因和蛋白表达的检测。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果:转染细胞与未转染细胞形态非常相似,均呈多边形、多角形,"铺路石"样排列;广谱角蛋白染色阳性,波丝蛋白染色阴性;未转染细胞体外培养36 d后停止生长,群体倍增数(population doublings,PDL)为9,转染细胞增殖活跃,PDL值超过80;RT-PCR和Western印迹结果均显示,hTERT在转染细胞中稳定表达,而在未转染细胞中不表达。结论:转染外源性hTERT基因的OME细胞呈稳定增殖的永生化状态。
- 陈之锋吕标郑超群胡逢春陶谦
- 关键词：口腔黏膜上皮细胞端粒酶反转录酶永生化
- p63蛋白在鼠口腔黏膜干细胞中的时相表达和意义被引量：1
- 2009年
- 目的:检测p63蛋白及其5种亚型在鼠口腔黏膜组织和口腔黏膜干细胞分化前后的表达特点,探讨p63作为口腔黏膜干细胞标记的可能。方法:以鼠抗人/鼠p63蛋白和兔抗人/鼠Oct-4蛋白为一抗,分别采用免疫细胞荧光和免疫组织化学技术检测p63蛋白在口腔黏膜上皮干细胞克隆、鼠上腭黏膜以及Oct-4在鼠腭黏膜中的表达情况;采用RT-PCR法检测口腔黏膜干细胞在培养5d和14d时,p63蛋白5种亚型的时相表达及变化特点。结果:免疫荧光显微镜观察,培养细胞胞核中发出p63蛋白的绿色荧光和DAPI蓝色荧光。免疫组化显示,p63蛋白主要表达在鼠腭黏膜基底层并部分表达于棘层,但Oct-4只表达于基底层。RT-PCR显示,细胞在培养5d时,表达p63蛋白的TA、ΔN、α和β亚型,不表达γ亚型;在培养14d时,表达p63蛋白的TA和γ亚型,不表达ΔN、α和β亚型。结论:p63蛋白可在口腔黏膜干细胞和次分化细胞中表达,单独标记尚不足以精确示踪口腔黏膜干细胞,但是其亚型ΔNp63α和(或)ΔNp63β可能是口腔黏膜干细胞的特异性标记。
- 陶谦乔彬贺宝霞吕标郑超群陈之锋
- 关键词：P63蛋白OCT-4亚型分布
- 胚胎干细胞上清液诱导Tca8113细胞发生上皮-间充质转化的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:采用胚胎干细胞培养上清液诱导口腔鳞癌细胞发生上皮-间充质转化,初步探讨其意义。方法:应用129小鼠胚胎干细胞培养上清液诱导培养舌鳞癌Tca8113细胞,分别在1周和2周后,采用免疫荧光和免疫细胞化学检测诱导前、后Tca8113细胞中Oct4、角蛋白(CK)和波形丝蛋白(vimentin)的表达情况。半定量反转录PCR检测snail、slug、E-cadherin和CD44、Bmi-1、hTERT表达随诱导时间的变化情况。结果:Tca8113细胞经条件培养基诱导后,细胞形状逐渐由铺路石样变为长梭形;Oct4集中表达在细胞核中,vimentin转变为阳性表达,CK表达无明显变化;上皮-间充质转化标记snail mRNA表达上调,E-cadherin下调,slug无明显变化。同时,癌干细胞标记CD44、Bmi-1和hTERT mRNA表达上调。结论:口腔鳞癌细胞经胚胎干细胞培养上清液诱导后,可发生上皮-间充质转化,从而可能具备部分干细胞特性。
- 乔彬陶谦
- 关键词：EMT上皮-间充质转化癌干细胞口腔鳞癌
- 体外培养鼠口腔黏膜干细胞的超微结构改变
- 2009年
- 目的:观察体外培养鼠口腔黏膜干细胞超微结构的变化。方法:双重酶消化法分离、培养昆明小鼠口腔黏膜上皮干细胞,光镜下观察干细胞生长及分化特征,透射电镜鉴定细胞的超微结构。结果:鼠口腔黏膜干细胞初始保持未分化的克隆样生长,14d后分化成3种类型细胞,分别代表细胞不同的分化状态。光镜下细胞主要分为两种:一种细胞小而折光性强,另一种细胞大而折光性弱。电镜下,单个细胞的胞质中布满张力原纤维,细胞间形成桥粒结构,符合上皮细胞超微结构特征,可见3种细胞形态:一种细胞胞核大胞质少,一种细胞胞核小胞质多,另有少量细胞的核浓染、固缩。结论:光镜下观察到的小而折光性强的细胞和电镜下观察到的胞核大胞质少的细胞为口腔黏膜干细胞,通过对细胞超微结构的分析将有助于口腔黏膜干细胞的鉴定。
- 陶谦乔彬吕标郑超群
- 关键词：口腔黏膜干细胞细胞培养超微结构
