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花生根全长cDNA文库的构建及分析: 2014年; 以闽花6号为材料,利用SMART技术成功构建了花生根全长cDNA文库.原始文库滴度为1.3×10^6cfu/mL,重组率达95.8%,插入片段大小为750～2000bp,符合全长cDNA文库的质量标准.随机挑选35个单克隆进行双向测序,共获得30条有效序列.通过与NCBI非冗余蛋白质数据库进行比对和注释,获得已知功能基因或具推测功能的基因15个,未知功能基因7个,新基因13个,其中34个（97.1%）基因为花生未报道的基因.因此,该文库的构建为克隆和研究花生根部重要表达基因、从分子水平上揭示花生根的生长发育规律提供了基础.; 陈华张冲蔡铁城邓烨郑奕雄庄伟建; 关键词：花生 SMART技术全长CDNA文库

花生脱落酸8'-羟化酶基因AhCYP707A4的克隆及表达分析: 2016年; 脱落酸(ABA)在植物生长发育和逆境胁迫响应等过程中具有重要作用。脱落酸8'-羟化酶是ABA分解及其代谢的关键酶,可降解内源ABA水平。本研究利用Reverse Transcription PCR(RT-PCR)的方法从花生品种闽花6号叶片中克隆了脱落酸8'-羟化酶基因AhCYP707A4的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)。AhCYP707A4基因ORF长1 446 base pairs(bp),编码481个氨基酸。生物信息学分析表明,该蛋白N端有一个长32个氨基酸残基的信号肽序列,其后为P450蛋白保守区,符合典型的P450蛋白的结构特征。氨基酸多序列比对显示AhCYP707A4具有较高的保守序列。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在不同发育时期的果皮、种皮和胚中均有表达。在果皮和种皮中,该基因在花生果针入土后40 d(days after pegging,DAP)表达量最高,而胚中在60 d中表达量达到最高。AhCYP707A4基因可能在花生发育过程起重要的调控作用,是调控花生种子发育特别是胚发育的重要候选基因。; 康苗苗张冲庄瑞蓉李毓陈华; 关键词：花生基因克隆胚发育

花生预苯胺酸脱氢酶基因AhADH的克隆及分子特性分析被引量：1: 2014年; 通过改良的RACE技术从花生中分离并克隆出ADH全长cDNA序列,并命名为AhADH,其全长为1 155 bp,含一个编码269个氨基酸,长度为810 bp的开放阅读框。生物信息学分析显示AhADH蛋白的分子质量是30.65 kD,理论等电点是6.07,二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。序列比对表明花生ADH氨基酸序列含预苯酸/预苯胺酸脱氢酶结构域,且与多种其他植物的ADH具有高度同源性。qRT-PCR分析表明该基因具有组织表达差异性,且在茎中表达量最高。; 张福婷周双彪张冲陈华蔡铁城庄伟建; 关键词：花生组织表达谱

花生抗黄曲霉的植物双价表达载体的构建: 2014年; 通过常规育种培育的抗黄曲霉品种皆表现抗性不稳定,鉴此开展通过基因工程手段以培育高抗以及无筛选标记的转基因花生品种。几丁质酶基因CHI和葡聚糖酶基因GLU皆为广谱性的抗病基因且具有协同增效作用。分别以pSC1300-8-CHI和pSC1300-13-GLU载体为基础,通过PCR技术在CHI基因的特异启动子8#前端和T-nos末端分别加入NcoⅠ酶切位点和AflⅡ酶切位点,在GLU基因的特异启动子13#前端和T-nos末端分别加入ApaⅠ酶切位点和SpeⅠ酶切位点,通过酶切、连接将上述2个基因连接在抗生素自我删除载体pLoxp上,获得了具有抗生素自我删除选择标记的双价果种皮特异表达载体pLoxp-8-CHI-13-GLU。经过限制性内切酶鉴定,该植物表达载体构建成功。; 肖宇陈湘瑜陈华陈剑洪庄伟建; 关键词：抗黄曲霉

花生叶全长cDNA文库的构建和部分表达序列标签分析被引量：2: 2014年; 以‘闽花6号’品种为材料,利用SMART技术成功构建了花生叶不同生育时期混合的全长c DNA文库,并对文库的部分序列进行测序及分析.结果表明,该文库原始库容为2.25×106cfu·m L-1,重组率达100%,插入片段大小为750-2000bp,平均插入片段大小为1000 bp,达到文库质量要求.随机挑选50个单克隆进行5'端测序,共获得50条有效序列.通过与NCBI非冗余蛋白质数据库进行比对和注释,获得已知功能基因或具推测功能的基因25个,未知功能基因14个,新基因11个,其中49个(98%)基因为花生未报道的基因.参与代谢过程和胁迫响应的基因表达量较高.; 陈华蔡铁城张冲邓烨熊发前唐荣华周双彪庄伟建; 关键词：花生 SMART技术全长CDNA文库表达序列标签

拟南芥AtTTG1基因的克隆及用于转化花生的MAR调控表达载体构建被引量：2: 2014年; 黄曲霉毒素污染对花生产业危害巨大,通过基因工程改变花生果种皮结构以提高花生抗黄曲霉能力。根据GenBank中拟南芥AtTTG1基因的cDNA编码区设计引物,通过RT-PCR克隆AtTTG1基因,结果显示,克隆获得的片段长1026bp,与基因库中数据比对相同,该片段编码341个氨基酸,预测其蛋白分子量为86.96KDa,等电点为4.85。结合实验室已获得的花生果种皮特异启动子S19和MAR序列调控的植物表达载体pLMAR,构建了植物高效表达载体pLMAR-S19-TTG1,并将其导入根癌农杆菌EHA105。为进一步对花生进行遗传转化,获得转基因高抗黄曲霉花生奠定基础。; 陈湘瑜郑国栋黄金堂庄伟建; 关键词：花生抗黄曲霉

花生茎全长cDNA文库的构建与分析被引量：2: 2014年; 为挖掘花生茎中重要的功能基因,了解花生茎生长发育的分子机理,以闽花6号为材料,利用SMART技术成功构建了花生茎不同生育时期混合的全长cDNA文库,并对文库的部分序列进行了测序及分析.结果表明,该文库原始库容为1.25×106 cfu· mL-1,重组率达100％,插入片段大小为750～2 000 bp,平均插入片段大小为1 000bp,达到文库质量要求.随机挑选50个单克隆进行5＇端测序,共获得50条有效序列.通过与NCBI非冗余蛋白质数据库进行比对和注释,获得已知功能基因或具推测功能的基因29个,未知功能基因9个,新基因12个,其中47个（94％）基因为花生未报道的基因.因此,该文库的构建为克隆和研究花生茎部重要表达基因,从分子水平上揭示花生茎的生长发育规律提供了基础.; 陈华邓烨张冲蔡铁城熊发前唐荣华周双彪庄伟建; 关键词：花生 SMART技术全长CDNA文库

不同发育时期花生胚混合全长cDNA文库的构建与分析被引量：3: 2014年; 【目的】深入了解花生胚发育的分子机制,获得花生胚发育相关基因。【方法】以优质花生品种闽花6号为材料,分别取花生果针入土后10、20、30、40、50和60 d(day after pegging,DAP)的胚作为试验材料,用CTAB法提取花生胚总RNA,采用SMART(Switching Mechanism At 5’end of RNA Transcript)技术合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切后胶回收纯化双链cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上,电击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建不同发育时期花生胚混合全长cDNA文库,进行小规模测序。采用生物信息学分析手段对所获得的EST进行功能注释。【结果】构建了不同发育时期花生胚混合全长cDNA文库,文库的库容为3.5×106cfu/mL,重组率95.8%,插入片段长度在500—2 000 bp,平均长度超过1 000 bp。随机挑取60个克隆进行5′端测序,共得到60条高质量的EST序列,BLASTX结果显示,有39条序列(65%)与GenBank中大豆、花生、苜蓿等植物上已公布的序列有较高同源性,其中,有32条具有已知或推测的功能,7条序列功能未知。其余21条(35%)序列在NCBI的非冗余蛋白数据库中没有找到与之相匹配的序列,可能为花生新的EST序列。利用BLAST2GO对所得序列进行GO注释分析,结果表明,参与抗逆与防御、蛋白质合成与运输、油脂合成与代谢、转录与调控以及种子萌发、休眠、胚发育相关的基因比较丰富,还有部分基因参与信号传导以及光形态建成等过程。KEGG代谢途径分析表明,随机测序所获得的序列中主要包括α-亚麻酸代谢和亚油酸代谢。【结论】利用SMART技术成功构建了不同发育时期花生胚混合全长cDNA文库;小规模EST测序分析获得了部分与花生胚发育相关的基因,如亚油酸9S-脂肪氧合酶、油体蛋白、锌指蛋白、热休克蛋白90、胚胎发育晚期丰富蛋白、脂肪氧合酶以及DREB转录因子等。; 陈华邓烨张冲蔡铁城郑奕雄庄伟建; 关键词：花生 CDNA文库 SMART技术表达序列标签

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国家高技术研究发展计划(2013AA102602-5)

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