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不同基因型番茄高效组培再生体系的建立被引量：11: 2013年; 以‘特大瑞光’、‘菜都982F1’和‘菜都六号’3种番茄为试材,用番茄的下胚轴、子叶、真叶为外植体,研究了不同基因型、不同外植体材料和不同激素浓度对番茄再生体系的影响,以期筛选出适宜不同基因型番茄离体培养的最佳培养条件。结果表明:3个番茄品种均在MS+2.0mg/L BA+0.30mg/L NAA培养基中的愈伤组织诱导率最高。‘特大瑞光’诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+2.0mg/L BA+0.10mg/L NAA;"菜都982F1"诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+2.0mg/L BA+0.05mg/L NAA;"菜都六号"诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+3.0mg/LBA+0.05mg/L NAA。3个不同番茄品种在MS+0.05mg/L NAA培养基中均获得了最佳的生根效果。; 裴华丽李美芹刘永光薛其勤乔宁吕金浮; 关键词：番茄

番茄黄化曲叶病毒双抗体夹心ELISA检测方法的初步建立被引量：6: 2013年; 以纯化的番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)外壳蛋白为抗原,免疫家兔制备并纯化出TYLCV的多克隆抗体IgG,以此抗体做包被抗体,并用碱性磷酸酶(AP)对其进行标记作为酶标抗体,从而建立了番茄黄化曲叶病毒的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法。通过ELISA方阵试验确定该法的最佳工作浓度为酶标抗体(IgG-AP)作1∶400倍稀释,包被抗体浓度为6.25μg.mL-1;并且确定了抗原最低检出浓度为9.75ng.mL-1。采用该法对山东寿光的田间病样进行了定性和定量检测,结果表明建立的DAS-ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于番茄黄化曲叶病毒的常规检测。; 乔宁李美芹吕金浮刘永光王兴翠竺晓平; 关键词：番茄黄化曲叶病毒 DAS-ELISA

番茄黄化曲叶病毒抗性检测DNA提取方法的优化及应用被引量：2: 2017年; 通过对传统DNA提取方法进行优化和改进,得到一种快速提取番茄DNA的方法。综合比较改进法、商品化试剂盒(经典法)和其他试剂盒(快速法)提取番茄DNA的效果。结果表明:改进法相比经典法提取的DNA质量稍有差别,但用时较少,完全可以满足后续PCR试验要求,尤其适用于番茄黄化曲叶病毒的大规模抗性检测;同时该法无液氮及其他有毒溶剂的加入,不仅节省了试验时间和试验成本,而且大大降低了试验的危险性。; 乔宁阎振鑫尼秀梅代惠洁竺晓平孔令广; 关键词：番茄黄化曲叶病毒 DNA提取抗性检测

辣椒轻斑驳花叶病毒寿光分离物的RT-PCR检测及其序列分析被引量：1: 2017年; 以山东寿光地区感染辣椒轻斑驳花叶病毒的辣椒为试材,采用试剂盒提取感病辣椒的总RNA并进一步反转录成cDNA,参照已报道的PMMoV检测引物合成特异性引物PMMoV-F和PMMoV-R;以获得的cDNA为模板进行PCR扩增,研究了辣椒轻斑驳花叶病毒寿光分离物。结果表明:得到分子量约是576bp的条带,纯化后进行基因测序;通过测序结果分析比对可知,PMMoV寿光分离物序列与诸多地区的分离物同源性较高,可达到99%~100%。; 唐玉海乔宁孙晓辉; 关键词：RT-PCR

两种甜瓜病毒寿光分离物的分子检测与鉴定被引量：10: 2015年; 甜瓜坏死斑点病毒（Melon necrotic spot virus ,MNSV）及瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows vi-rus ,CCYV）近年来在瓜类种植区均大面积发生,危害较为严重,已成为制约甜瓜生产的重要因素。本研究广泛收集疑似感染 MNSV 及 CCYV 的甜瓜病叶,从中提取植物总 RNA 进行 RT-PCR 扩增,将产物分别连接到 pEASY-T1 Simple 克隆载体上,对含有目的片段的重组子进行测序及比对分析。结果显示得到了与预期结果一致的 DNA序列,其扩增产物大小分别为673 bp（MNSV）和877 bp（CCYV）。同源性分析结果表明,MNSV 和 CCYV 寿光分离物的核苷酸序列与中国其他地区或一些国家已报道的分离物同源性达99%～100%。; 乔宁魏家鹏李美芹刘永光姜会霞竺晓平田素波

黄瓜上甜瓜黄斑病毒寿光分离物的初步鉴定及序列分析被引量：11: 2015年; 在山东寿光黄瓜保护地种植区采集到疑似感染甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)的黄瓜病叶,采用RT-PCR对其进行检测,将扩增产物连接到pEASY-T1 Simple克隆载体后进行测序,结果显示目的片段的大小为505bp,与预期结果一致;序列同源性比对分析结果表明,黄瓜上MYSV寿光分离物与中国三亚的MYSV-Sanya分离物(甜瓜-GQ397254)和中国台湾MYSV-TW(西瓜-FJ386391)亲缘关系较近,同源性可达到98%。; 乔宁王兴翠田素波刘永光姜会霞李美芹竺晓平; 关键词：黄瓜 RT-PCR

番茄黄化曲叶病毒病的发生与防治策略被引量：3: 2013年; 介绍了番茄黄化曲叶病毒病发生与棚内温度、湿度的关系,并提出了防治该病的综合措施,包括关闭放风口、棚前(棚外)点种玉米、在棚顶安装遮阳网、套种玉米、勤浇水、增施生物有机肥、控制烟粉虱等。; 王成增姜会霞常怀云吕化霞刘永光乔宁竺晓平; 关键词：病毒病黄化番茄棚内温度遮阳网烟粉虱

秋延迟温室防控番茄黄化曲叶病毒的栽培新模式被引量：5: 2013年; 利用烟粉虱喜食玉米的特点,在秋延迟温室中采用玉米—番茄避病栽培模式,能将番茄黄化曲叶病毒病感病品种的发病率控制在10%以下,并且对番茄的产量和品质无影响。; 刘永光姜会霞王成增李美芹乔宁竺晓平; 关键词：黄化曲叶病毒秋延迟番茄温室感病品种烟粉虱

山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4: 2012年; 利用双生病毒简并引物PA/PB,对山东寿光地区保护地疑似感染番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的番茄植株进行PCR检测,结果证明番茄病叶由TYLCV侵染所致。以提取的病叶总DNA为模板,扩增得到长约770bp的TYLCV-CP基因片段,克隆至pEASY-T1Simple载体,然后用XhoI和EcoRI将其切下并插入到pET-32a表达载体中,构建了寿光地区TYLCV分离物的外壳蛋白基因原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)诱导获得了50kD重组蛋白,Ni2+-NTA亲和层析纯化和Western印迹分析证明目的蛋白为TYLCV外壳蛋白,且具有良好的抗原活性。; 乔宁李美芹郭宝太刘永光裴华丽竺晓平; 关键词：番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因基因克隆原核表达

番茄黄化曲叶病毒CP基因的原核表达载体构建选择被引量：1: 2012年; [目的]筛选出目的蛋白能够高效表达的重组质粒。[方法]利用原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)成功构建了番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的重组质粒p32a-CP和p28a-CP,并通过PCR和双酶切鉴定了序列连接的正确性;再分别将2个载体转化至BL21(DE3)中,采用不同浓度的IPTG对其进行诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳检测。[结果]测序结果显示TYLCV-CP基因已定向插入p32a-CP和p28a-CP中;SDS-PAGE电泳结果显示分子量约为50 kD的目的蛋白在重组载体p32a-CP中得到了高效表达,而在重组载体p28a-CP中未表达。[结论]为下一步的抗体制备及TYLCV的免疫学检测奠定了基础。; 乔宁李美芹刘永光王兴翠唐玉海魏家鹏; 关键词：番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因

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