国家自然科学基金(39730210) 作品数:73 被引量:665 H指数:15 相关作者: 钱桂生 毛宝龄 张青 李琦 张德明 更多>> 相关机构: 第三军医大学新桥医院 第二军医大学 广州军区广州总医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
地塞米松对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶活性诱导能力丧失的机制研究 2008年 目的:通过测定人肝癌SMMC 7721细胞酪氨酸转氨酶(TAT)cDNA序列,并观察其糖皮质激素受体(GR)通路是否存在异常,以探讨地塞米松(Dex)丧失诱导SMMC-7721细胞TAT活性的机制。方法:RT-PCR扩增SMMC-7721细胞全长TAT cDNA并进行测序;采用实时定量PCR观察Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA表达的影响,并与HepG2细胞作对照;采用电穿孔法将GR特异性报告基因GRE-tk-LUC及GRE-MMTV CAT分别瞬时转入SMMC-7721细胞中,观察Dex对荧光素酶(LUC)和氯酶素乙酰转移酶(CAT)表达的影响,并与HepG2细胞作对照。结果:SMMC-7721细胞TAT cDNA中第576位碱基存在同义突变;Dex能够诱导SMMC-7721细胞中TAT mRNA的表达,最大诱导倍数为2.22,明显低于HepG2细胞(15.1倍,P<0.01);Dex诱导了SMMC-7721细胞LUC及CAT的表达,与HepG2细胞无显著差异。结论:Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA诱导水平降低,可能是TAT活性不增高的主要原因。 李忆东 刘宇健 卢建关键词:糖皮质激素 受体 转录激活 Mac-1在细胞内走向的直视研究 被引量:2 2004年 分别构建荧光蛋白(FP,fluorescenceprotein)与Mac-1的两个亚基(CD11b,CD18)融合蛋白表达载体,并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1fusedwithfluorescenceprotein)具有与正常白细胞表达的野生型Mac-1基本一致的结构与功能的基础上,结合应用PE标记的CD11b单抗,通过激光共聚焦显微镜观测CD11b,CD18在PMA刺激和ICAM-1结合后于胞内的走向与归宿.结果显示:(ⅰ)在静态的细胞膜上看不到Mac-1,PMA活化后1h,胞膜上可见CD11b-PE和YFP-CD18群集,2h后内吞,内吞后YFP-CD18的荧光减弱,提示Mac-1有部分降解;24h后PMA再次活化,部分CD11b-PE与YFP-CD18可再次出现在膜上,说明Mac-1还可以被循环利用.(ⅱ)ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞作用后,4h内粘附增加,同时伴有Mac-1-FP的群集,8h后粘附减少,同时伴有Mac-1-FP的荧光逐渐减弱,这一过程与PMA活化后Mac-1-FP的变化过程类似,提示ICAM-1作用后也可能出现内吞并降解.由以上结果可以得出结论,Mac-1活化后的走向是由胞浆内转位到质膜上,然后内吞,内吞后被降解或可被再利用,与此同时粘附活性亦发生相应的变化,提示受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一. 严鸣 毛积芳 韦毅 钟纪根 杨生生 徐仁宝关键词:MAC-1 PMA ICAM-1 细胞 免疫反应 内毒素血症大鼠心肌TLR4与IL-18 mRNA表达的变化 被引量:9 2003年 目的 :观察内毒素 (LPS)血症时心肌组织Toll样受体 4 (Toll likereceptor 4 ,TLR4 )及IL 18 mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL 18在LPS急性心肌损伤中的作用。方法 :运用RT PCR与ELISA分别检测心肌TLR4和IL 18mRNA的表达及心肌组织匀浆TNF α浓度。结果 :LPS组心肌中TLR4与IL 18 mRNA表达分别比正常对照组显著增强 (1 5 1± 0 0 7)vs(0 85± 0 0 3) ,(1 6 5± 0 0 4 )vs(0 5 6± 0 0 3) ,心肌组织匀浆中TNF α浓度显著增高 (0 6 7± 0 0 2 )ug lvs(0 39± 0 0 5ug l)。结论 :LPS血症时心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL 18分泌增加 ,表明二者在LPS血症心肌损伤中起重要作用。 张德明 李永旺 毛宝龄 钱桂生关键词:内毒素血症 心肌 IL-18 MRNA表达 TOLL样受体4 白介素-18 TLR4及MD2反义基因对内毒素诱导的肺泡Ⅱ型细胞活化的影响 被引量:3 2010年 目的观察Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)及myeloid differentiation protein2(MD2)反义基因对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响。方法培养的肺泡Ⅱ型细胞分为:正常细胞(对照)组、LPS组、LPS+转染空载体组、LPS+转染TLR4反义基因组、LPS+转染MD2反义基因组、LPS+转染TLR4-MD2反义基因组(n=8)。Northern blot检测转染细胞的TLR4及MD2 mRNA表达,Western blot检测转染细胞TLR4及MD2蛋白表达,电泳迁移率改变法检测NF-κΒ的活性,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量。结果与对照组比较,LPS刺激后的细胞TLR4及MD2mRNA和蛋白表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6的生成均显著增加(P<0.01);而转染反义基因组细胞与其他LPS刺激组比较,TLR4及MD2mRNA和蛋白的表达、NF-κB活性及TNF-α和IL-6的含量均明显降低(P<0.01)。结论 TLR4及MD2反义基因能有效抑制LPS诱导的肺泡Ⅱ型细胞的活化。 李永旺 麻莉 张德明 钱桂生关键词:内毒素类 肺泡 上皮细胞 TOLL样受体4 不同剂量脂多糖对大鼠急性肺损伤效应的观察 被引量:62 2004年 目的 观察脂多糖 (LPS)诱导的急性肺损伤 (ALI)大鼠血浆IL 4含量变化 ,探讨其在ALI发生发展过程中的意义。方法 12 0只Wistar大鼠根据注射LPS剂量随机分为 2、4、6和 8mg/kg组 ,并设立生理盐水对照组 (NS组 ) ,伤后 1、2、4和6h观察大鼠的一般情况、动脉血氧分压 (PaO2 )、肺组织湿质量 /干质量比值、肺组织病理改变 ,并检测血浆IL 4含量。结果 ①梯度剂量LPS可以引发程度不同的大鼠ALI ;当LPS≥ 6mg/kg时 ,发生急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)。②LPS可以诱导大鼠血浆IL 4含量升高 ;当LPS≥ 6mg/kg时 ,血浆IL 4含量峰值显著提高。结论 ①尾静脉注射LPS可以复制出大鼠ALI模型。②LPS≥ 6mg/kg是大鼠发生ARDS的临界剂量。③LPS诱导大鼠血浆IL 李琦 钱桂生 张青 王长征关键词:急性呼吸窘迫综合征 急性肺损伤 脂多糖 白细胞介素-4 急性肺损伤大鼠多形核白细胞L选择素变化及其在肺内扣押中的作用 被引量:5 2001年 目的 探讨急性肺损伤 (ALI)大鼠循环血多形核白细胞 (PMN)L选择素表达的变化及其于肺内扣押中的作用。方法 通过静脉注射内毒素 (5mg/kg)复制大鼠ALI模型 ,5 6只大鼠随机分为7组 ,每组 8只。分别为 :(1)内毒素 5min组 ;(2 )内毒素 15min组 ;(3)内毒素 30min组 ;(4 )内毒素 6 0min组 ;(5 )fucodin干预 5min组 ;(6 )Fucodin干预 15min组 :静脉注射fucodin 5mg/kg后 ,立即静脉注射内毒素 5mg/kg ;(7)正常对照组 :静脉注射等量生理盐水替代内毒素。用免疫荧光间接法和流式细胞仪检测大鼠ALI过程中PMNL选择素蛋白表达的变化 ;用髓过氧化酶 (MPO)分析法及组织学检查定量ALI过程中PMN于肺内的扣押量。结果 (1)PMNL选择素的表达于静脉注射内毒素后 5min为7 8± 1 6 ,与对照组 (10 5± 2 1)比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,静脉注射内毒素后 15min(2 9± 0 5 )、30min(3 5± 0 7)和 6 0min(4 9± 0 7)与对照组比较差异更具显著性 (P <0 0 1)。 (2 )大鼠肺组织MPO活力于静脉注射内毒素后 5min [(0 35 9± 0 0 74)U/mg肺组织 ]、15min [(0 490± 0 0 6 9)U/mg肺组织 ]、30min [(0 5 6 5± 0 111)U/mg肺组织 ]、6 0min [(0 710± 0 112 )U/mg肺组织 ]与对照组 [(0 0 6 9± 0 0 11) 徐兴祥 钱桂生 朱元珏关键词:内毒素 急性肺损伤 多形核白细胞 L选择素 单个巨噬细胞超氧阴离子水平的定量检测方法 被引量:3 2002年 目的 :建立单个巨噬细胞超氧阴离子 (O 2 )水平的定量检测方法 ,从而达到在单细胞内同时检测O 2和细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的目的。方法 :分离小鼠腹腔巨噬细胞 ,用NBT还原法显示细胞产生O 2 的水平 ,以细胞加入NBT前与染色后的透光强度之比来定量表示该细胞产生O 2 的量 ;以荧光探针Fura - 2 /AM负载细胞检测单细胞内 [Ca2 + ]i。结果 :①分别用PMA、OZ刺激细胞并用NBT还原法染色后细胞内均有黑色沉淀 ,但前者分布均匀而后者所产生沉淀多偏于一侧 ,呈明显的局域性分布 ;②用NBT孵育 10min后 ,细胞透光强度没有明显变化 (n=4 3,P >0 .0 5 ) ,用NBT刺激细胞产生黑色沉淀后细胞透光强度明显降低 (P <0 .0 1,n =4 3)。③在不同的聚焦状态下 ,无细胞背景区的透光强度没有明显变化 ,而细胞区透光强度变化明显 ,但各个细胞透光强度的变化趋势是一致的 ;④PMA处理 3批巨噬细胞并用NBT法染色得到 3组ROI值的分布情况提示用ROI值定量是合理的但批间差异过大 ;⑤静息状态下的小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 + ]i与细胞受PMA刺激后的ROI呈显著正相关 (n =4 3,r =0 .4 2 ,P <0 0 1)。结论 :用NBT还原法染色前后细胞透光强度比值可以代表该细胞产生O 2 的量 ,进而我们可以在单细胞内同时检测O 2 和 [Ca2 + ]i。 朱晓燕 徐仁宝关键词:超氧阴离子 巨噬细胞 MD2在内毒素激活肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达及作用 被引量:4 2007年 目的探讨髓样分化蛋白(myeloid differentiation protein-2,MD2)在内毒素(LPS)激活肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡcells)中的表达及可能作用机制。方法通过RT-PCR的方法检测MD2mRNA在ATⅡcells的表达;电泳迁移率改变法检测LPS刺激后的ATⅡcellsNF-κB活性的变化;ELISA检测ATⅡcells培养上清中TNF-α和IL-6的含量变化。结果正常ATⅡcells表达有MD2mRNA,LPS刺激后表达增强;其表达在1~103ng/mlLPS范围内呈浓度依赖性增强。LPS刺激后,ATⅡcellsNF-κB活性及TNF-α和IL-6的生成均呈浓度依赖性的增强。结论MD2在LPS激活ATⅡcells中起着重要作用。 李永旺 张德明 钱桂生 毛宝龄关键词:内毒素 TOLL样受体4 急性肺损伤 重度创伤后全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征 被引量:41 2001年 目的 :提高对重度创伤后并发全身炎症反应综合征 (SIRS)和多器官功能障碍综合征 (MODS)的认识。方法 :分析了 35 5例 SIRS和 12 8例损伤严重度评分 (ISS) >16分的 MODS患者临床资料。患者应至少符合修订后2项或 2项以上 SIRS标准 (包括发热、体温过低、心动过速、呼吸急促或白细胞计数异常 ) ;MODS则符合各器官功能障碍标准 ,而且符合机体遭受打击 2 4小时后序贯出现 2个或 2个以上器官功能不全。结果 :35 5例患者中符合修订后 SIRS 2项标准者 12 7例 (35 .8%) ,3项者 136例 (38.3%) ,4项者 92例 (2 5 .9%)。死亡 116例 (32 .7%) ,其中死于 MODS者 83例 (71.6 %)。符合 SIRS2项标准者死亡 12例 (9.4%) ,3项者死亡 2 3例 (16 .9%) ,4项者死亡48例 (5 2 .2 %) ,SIRS2、3项与 4项比较差异非常显著 (P均 <0 .0 1)。83例死亡的 MODS患者中 ,死于 2个脏器障碍者 16例 (34 .0 %) ,3个者 2 5例 (6 9.4%) ,4个者 30例 (90 .9%) ,≥ 5个者 12例全部死亡 (10 0 .0 %)。死于非MODS者 33例 (2 8.4%)。结论 :重度创伤后 ,创伤后休克、感染及创伤后免疫功能障碍均可引发 SIRS,严重者可导致 MODS,代偿性抗炎反应综合征。 任成山 陆海华 杜晓锋 高全杰 郭中杰 毛宝龄关键词:创伤 全身炎症反应综合征 多器官功能障碍综合征 并发症 Lipopolysaccharide induced hyper- and hypo-responsiveness in macrophage cell lines 被引量:1 2003年 Objective: To build a cell model of LPS-induced hyper- and hypo-responsiveness in macrophage cells .Methods: Macrophage cell line RAW264.7 was pre-cultured with or without 10 ng/ml LPS for 18 h, then challenged with lipopolysaccharide(LPS), or MDP, Zymosan, PAF, FMLP, PMA for 24 h.The levels of TNF-α , IL-1, IL-6, IL-10 , NO and O-2 were measured.Results: LPS pretreatment markedly inhibited TNF-α NO and IL-6 production, but increased IL-1, IL-10 and O-2 release to LPS challenge.LPS pretreatment also altered macrophage responsiveness to the other stimuli.Conclusion: LPS can induce hyper- and hypo-responsiveness simultaneously in the macrophage cell lines.Changes in macrophage responsiveness depend on stimuli and effectors which are measured. 刘辉 孙为民 徐仁宝关键词:高反应性 低反应性