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中国部分地区柑桔木虱体内感染Wolbachia的检测及其系统发育分析被引量：2: 2010年; Wolbachia是一种广泛分布于节肢动物体内的共生细菌,该共生菌经寄主卵的细胞质传播并参与多种寄主生殖活动调控,对节肢动物的物种进化有着重要意义并可能应用于害虫的生物防治。本研究以柑桔黄龙病(Huanglongbing,HLB)的主要传播媒介——柑桔木虱Diaphorina citri为研究对象,通过Wolbachia的16S rDNA、细胞分裂基因(ftsZ)、表面蛋白基因(wsp)的特异引物对来自于中国广西北海、广西柳州、广东深圳、广东阳春、福建福州5个地区的柑桔木虱进行PCR扩增,并对扩增产物进行克隆测序,与GenBank中相关序列进行比对分析,建立了柑桔木虱共生Wolbachia的系统发育树。结果显示上述5个地区的柑桔木虱均存在Wolbachia感染,通过Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因DNA序列的系统发育分析表明,5个地区的柑桔木虱体内的Wolbachia均属于B组;基于wsp基因的系统发育分析进一步表明5个地区的亚洲柑桔木虱体内的Wolbachia属于B组的Con亚组,且不同地区柑桔木虱体内的Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因序列差异不明显。研究结果为认识柑桔黄龙病传播媒介昆虫的进化及其综合防治提供了重要的参考依据。; 王中康田圣超贤家旭陈世伟刘婷婷殷幼平; 关键词：WOLBACHIA FTSZ WSP 系统发育柑桔黄龙病

中国不同地区亚洲韧皮杆菌遗传多样性分析被引量：17: 2009年; 柑桔黄龙病是最严重的柑桔病害之一,现已威胁世界柑桔产业。已被证实在中国南部该病害通过嫁接和木虱传播。因此黄龙病的流行病学研究就显得尤为重要。本研究中,基于外膜蛋白(omp)基因的PCR-RFLP的方法被用来研究中国南部各柑桔主产区的亚洲韧皮部杆菌的遗传多样性。研究采用不同的限制性内切酶消化各地区的亚洲韧皮部杆菌的omp基因产生了不同的RFLP指纹图谱,并对各地亚洲韧皮部杆菌的omp基因进行克隆测序然后构建系统发育树。结果显示:中国不同地理区域的亚洲韧皮部杆菌具有一定的遗传多样性,即便在某一特定的地区也有一定的差异。序列分析显示中国地区的亚洲韧皮部杆菌有很高的同源性。这些结果对揭示中国柑桔黄龙病的流行病学及制定科学有效的防治策略具有一定的指导意义。; 王中康周彬彬田圣超石小刚贤家旭陈世伟殷幼平; 关键词：黄龙病 RFLP 系统进化分析

抗柑桔溃疡病菌可溶性单链抗体的表达及鉴定被引量：3: 2009年; 前期采用核糖体展示技术筛选了抗柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv. citri,Xac)高亲和力单链抗体(Single chain variable fragment,scFv)GX13、GX44和GX95,为高效表达具有生物活性的单链抗体,本研究将前期筛选的高亲和力单链抗体基因转入大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达,点印迹和Western印迹检测可溶性单链抗体的表达水平,亲和层析纯化表达的单链抗体,酶联免疫吸附法(ELISA)检测纯化单链抗体的抗原结合活性.结果显示,3株抗柑桔溃疡病菌可溶性单链抗体在大肠杆菌HB2151中均获得成功表达,表达产物分子量(Mr)约为32.0×103,主要集中于细菌周质腔中.ELISA检测纯化的单链抗体都具备抗原结合活性,可进一步应用于柑桔溃疡病菌的免疫诊断和病害防治.; 袁青年四季殷幼平李泮志王中康; 关键词：柑桔溃疡病菌单链抗体可溶性表达

柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体基因的构建及表达产物的生物学活性分析被引量：3: 2009年; 【目的】构建鼠源抗柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体(dsFv)片段基因,原核表达并将其复性为具有免疫活性的dsFv抗体。【方法】采用PCR定点突变的方法构建dsFv重链(VH)及轻链可变区(VL)基因,分别将其连接入表达载体中,于E.coliBL21(DE3)中诱导表达,表达产物溶解后稀释入复性缓冲液中使其重折叠为dsFv抗体并纯化。SDS-PAGE及Western-blot分析表达及复性产物,BIAcore检测dsFv与Xac-LPS的亲和力,ELISA验证dsFv的特异性及稳定性。【结果】测序结果表明在VH的44位和VL的100位成功引入了半胱氨酸突变位点,实现了高效的原核表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE分析显示VH和VL的大小为23kD,并将其成功复性,复性后大小为46kD。BIAcore分析表明dsFv对Xac-LPS保持了很高的亲和力,亲和常数(KD)达到3.40×10-10M。ELISA证明dsFv具有较高的抗原特异性并且热稳定性较scFv提高近20℃。【结论】成功表达并复性了dsFv抗体,为柑橘溃疡病菌的免疫诊断提供了高效优质的重组抗体。; 王中康李泮志袁青于红李蒙殷幼平; 关键词：柑橘溃疡病菌包涵体复性

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