广东省自然科学基金(5300804)
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 相关作者：赖延东夏良平李秀英叶石敦更多>>
- 相关机构：中山大学暨南大学广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人PFP、GrB共表达诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达是否可以诱导人的喉癌细胞系Hep-2的凋亡及其作用的机理。方法利用脂质体2000将PFP、GrB共表达载体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB)转染人喉癌Hep-2细胞,采用荧光染料Hoechst33342法、流式细胞仪(FCM)检测、透射电镜观察Hep-2细胞的凋亡情况。以激光共聚焦显微镜检测重组载体转染后的Hep-2细胞内[Ca2+]i浓度的变化,并探讨其作用机理。结果pVAX1-PIG转染组的Hep-2细胞大量凋亡且其凋亡率显著高于对照组(P<0.05),透射电镜研究显示单个Hep-2细胞内亦出现凋亡的特征。Hep-2细胞内[Ca2+]i的浓度发生了变化,且由FI值增大可知细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高。结论PFP、GrB共表达能够诱导人Hep-2细胞的凋亡,且凋亡的发生与细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高有关。
- 李秀英夏良平赖延东
- 关键词：凋亡透射电镜流式细胞仪分析
- Recombinant GrB and PFP Co-expression in Hep-2 Cells
- 2008年
- 目的将在 Hep-2 房间完成 GrB 和 PFP 的合作表示并且分析在 Hep-2 房间上禁止效果的生长。方法淋巴细胞与人的喉的癌组织被分开， GrB 和 PFP 的完全的 Exon 碎片被 RT-PCR 经由提取淋巴细胞总数 RNA 放大，并且他们被重新结合到在向量 pVAX1 的 T7 倡导者下游。recombinant 原生质标志 pVAX1 猪是进有 Lipofectamine 2000 的 Hep-2 房间的 transfected。蛋白质的表示被 RT-PCR， MTT 和西方的污点试金识别。基因 GrB 和 PFP 的 RT-PCR 产品定序的结果与由定序分析的 DNA 的 GenBank 的数据一致。GrB 和 PFP cDNA 碎片在正确指示和 GrB 的开的读物碎片被克隆进 pVAX1 的向量， PFP 被维持。目标蛋白质在 transfected Hep-2 房间被检测，并且 Hep-2 房间生长上的 PFP 和 GrB 的禁止的效果被蓝色(MTT ) 测试的 thiazolyl 学习。pVAX1-PFP-IRES-GrB 原生质标志成功地被构造并且表示的结论，和 PFP 和 GrB 的表示能禁止 Hep-2 细胞的生长。
- 李秀英肖瑛赖延东
- 关键词：HEP-2细胞淋巴细胞
- PFP、GrB的共表达杀伤人喉癌Hep-2细胞的体外研究被引量：4
- 2008年
- 为探讨穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达对人喉癌(Hep-2)细胞生长的抑制及其诱导该细胞的凋亡作用,采用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段,构建共表达重组体pVAX1-PIG,并将其转染入人的Hep-2细胞株中。收集转染后的Hep-2细胞,采用软琼脂集落形成实验、MTT法、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪(FCM)检测分析各组人Hep-2细胞的生长抑制及其凋亡情况。结果显示pVAX1-PIG转染组的集落形成数目比空白对照组与pVAX1转染组明显减少(P<0.05),MTT检测结果显示对照组细胞生长速度比pVAX1-PIG转染组要快。TUNEL染色、FCM法检测均显示pVAX1-PIG转染组的Hep-2细胞大量凋亡且其凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。因此,PFP、GrB的共表达能够抑制人Hep-2细胞的生长并且可以诱导该细胞的凋亡。
- 李秀英夏良平赖延东
- 关键词：穿孔素颗粒酶B
- PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析
- 2008年
- 目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG。利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况。结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光。结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素(PFP)/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础。
- 李秀英夏良平赖延东
- 关键词：穿孔素颗粒酶B共表达间接免疫荧光
- 重组人颗粒酶B对胃癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨重组人颗粒酶B(G rB)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖活性的影响。方法重组表达质粒pCDNA 3.1-G rB经限制性内切酶N otⅠ与X baⅠ双酶切以及DNA测序鉴定无误后,转染处于对数生长期的SGC-7901细胞,同时设空白组、pCDNA 3.1转染组作对照。转染后48h,用RT-PCR法鉴定各组质粒的整合和G rB基因mRNA表达水平;同时采用软琼脂集落形成实验和M TT法检测胃癌细胞生长情况。结果与空白对照组(21.00±2.58)个和pCDNA 3.1转染组(18.50±2.64)个相比,pCDNA 3.1-G rB转染组(9.00±0.82)个的集落形成数目明显减少(P<0.05),细胞生长速度明显降低(P<0.05)。结论G rB对人胃癌细胞增殖有明显抑制作用。
- 叶石敦夏良平赖延东
- 关键词：颗粒酶B胃肿瘤增殖
