国家质检总局科技计划项目(2006IK019)
- 作品数：6 被引量：29H指数：4
- 相关作者：陈茹曾碧健毕英佐林志雄曹永长更多>>
- 相关机构：广东出入境检验检疫局华南农业大学汕头出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 副溶血性弧菌LUX^TM荧光PCR快速检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 根据LUXTM荧光PCR技术原理,针对副溶血性弧菌toxR基因的保守序列,设计了特异的LUXTM荧光标记引物,通过优化反应条件与参数,建立了可快速检测副溶血性弧菌的LUXTM荧光PCR方法。结果显示,该方法高度敏感,对纯菌的检测低限达到每个反应体系7个菌(CFU),经6 h增菌培养后检测,对样品的检测低限(CFU)达到100/25 g;特异性强,对副溶血性弧菌2株标准菌株和10株参考菌株的检验均呈阳性,而对霍乱弧菌等28株非目标菌的检测均呈阴性;重复性好,定量检测的批内和批间变异系数均小于1%。应用此方法检测水产样品103份,检出阳性样品6份,与TaqMan荧光PCR和SN标准的检测结果完全一致。用此方法可在8 h内完成对样品中副溶血性弧菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,但检测成本更低。
- 许如苏陈茹林彩华杨梓坚陈冠武
- 关键词：副溶血性弧菌
- 猪链球菌2型LUX荧光PCR检测方法的建立被引量：2
- 2009年
- 猪链球菌2型是一种严重的人兽共患病病原,为满足猪链球菌2型快速检测的需要,本研究根据猪链球菌2型Cps2J保守区设计LUX引物,首次利用LUX PCR方法对猪链球菌2型进行检测,并进行了敏感性和特异性试验及模拟样品检测试验。结果显示,本研究建立的猪链球菌LUX荧光PCR检测方法具有较好的敏感性和特异性,检测质粒样品的敏感性为10拷贝,检测模拟样品敏感性为102拷贝,与无乳链球菌、巴氏杆菌、粪链球菌、马链球菌兽疫亚种、沙门氏菌等无交叉反应。该方法的建立为猪链球菌2型的快速检测提供了新的途径。
- 王彩霞查成刚吴绍强林祥梅
- 关键词：猪链球菌2型LUXPCR
- 水泡性口炎病毒血清型特异LUX实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：8
- 2008年
- 采用LUX荧光核酸扩增技术原理,以水泡性口炎病毒(VSV)NJ、IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物,建立血清型特异的VSV荧光RT-PCR检测方法。试验表明,两种型特异的LUX荧光RT-PCR能分别特异地鉴定VSV血清型,对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织RNA样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明,LUX荧光RT-PCR的检测敏感性比常规RT-PCR提高达10倍以上,对VSV细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1 TCID50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实,该LUX荧光RT-PCR可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒,并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法,包括样品核酸提取、LUX荧光RT-PCR以及熔解曲线分析,可在3 h内完成。
- 陈茹刘中勇曾碧健曹永长陈俊伟赵吟林志雄毕英佐
- 关键词：水泡性口炎病毒
- LUX^(TM)荧光PCR快速检测沙门氏菌的研究被引量：2
- 2009年
- 本研究针对沙门氏菌invA基因的保守序列,设计特异的LUXTM荧光标记引物,通过优化反应条件和参数,建立可快速检测沙门氏菌的LUXTM荧光PCR检测方法。结果显示,该方法高度敏感,其对纯菌的检测低限达到102cfu/mL,经6h增菌培养后检测,对样品液的检测低限达到1cfu/mL;特异性强,测试的全部13株沙门氏菌标准和参考菌株均呈阳性反应,测试的全部27株非目标菌均呈阴性反应;重复性好,定量检测批内和批间的变异系数均小于2%。应用本方法检测食品样品240份,结果检出阳性4份,与TaqMan荧光PCR和SN标准检测结果完全一致。本方法可在8h内完成对样品中沙门氏菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,且检测成本较低。
- 许如苏陈茹林彩华杨梓坚陈冠武
- 关键词：沙门氏菌PCRTAQMANPCR
- 牛疱疹病毒Ⅰ型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立被引量：8
- 2007年
- 采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。
- 陈茹刘琳琳曾彩云曾碧健罗琼曹永长毕英佐
- 关键词：牛疱疹病毒I型牛传染性鼻气管炎
- 鸟分枝杆菌LUX荧光PCR快速检测方法的建立
- 应用LUX(Light Upon Extension)实时核酸扩增技术原理,以鸟分枝杆菌特异多拷贝插入序列IS1245基因为模板,设计筛选荧光标记引物,建立鸟分枝杆菌特异LUX荧光PCR检测方法。对48株微生物样品的检测...
- 陈茹刘志玲马静云赵吟吴晓薇曾碧健林志雄
- 关键词：荧光PCR
- 文献传递
- 四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立被引量：8
- 2010年
- 目的运用多重核酸扩增（PCR）联合变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC）分析技术原理,针对结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌以及副结核分枝杆菌建立多重PCR-DHPLC快速检测方法,实现同时检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌。方法根据四种分枝杆菌特异基因序列分别设计菌种特异核酸扩增引物,通过筛选优化试验建立四重核酸扩增体系,对核酸扩增产物采用DHPLC设备进行检测分析,每一菌种的核酸扩增产物分别形成DHPLC特征峰图。对结核分枝杆菌等51株分枝杆菌标准株和分离株样品以及沙门氏菌等22株常见微生物样品进行特异性检测试验 对四种分枝杆菌特异的核酸扩增产物分别制备克隆质粒,通过对梯度稀释的阳性质粒的检测试验,进行多重PCR-DHPLC灵敏度测试 对疑似病人痰液样品和疑似发病牛的组织样品进行检测,并与细菌分离培养法进行比较以验证临床检测效果。结果该方法能快速检测鉴别上述四种分枝杆菌,检测灵敏度达到102~103基因拷贝,从131份疑似病人临床样品中检出91份结核分枝杆菌阳性,从40份来自疑似发病牛群的临床样品中检出31份牛分枝杆菌阳性,检出率均高于细菌分离培养法。结论研究表明所建立的多重PCR-DHPLC方法能快速检测鉴别四种重要致病性分枝杆菌,为人畜结核、副结核病诊断提供一种新型分子生物学技术手段。
- 陈茹毕英佐刘志玲刘志辉马静云曾碧健吴晓薇周科林志雄
- 关键词：变性高效液相色谱结核分枝杆菌牛分枝杆菌副结核分枝杆菌多重PCR
