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鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2009年; 为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株。其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1024000和1∶2048000;McAb 1 A5和8H6的相对亲和力分别为0.9mg/L和0.7mg/L。间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好。这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础。; 郭莹洁杨俊兴花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军; 关键词：单克隆抗体

小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2012年; 用基因工程表达的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗PPRVH蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C6和4B10),其细胞培养上清液ELISA效价分别为1:256和1:128,腹水ELISA效价分别为1:128000和1:64000。亚型鉴定表明,2C6和4B10分别为IgG2b和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与PPRVH蛋白和PPRV反应,不与其它相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。这2株单克隆抗体的获得为研究PPRVH蛋白生物学特性及建立PPRV免疫学检测方法奠定了基础。; 孙洁杨俊兴吕建强阮周曦陶虹陈兵秦智锋花群义; 关键词：小反刍兽疫病毒单克隆抗体

4种重要虫媒病的核酸液相芯片高通量检测方法的建立被引量：8: 2010年; 为建立可检测鹿流行性出血热病毒（EHDV）、阿卡斑病毒（AKV）、蓝舌病病毒（BTV）和水泡性口炎病毒（VSV）的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中BTV的VP7基因、EHDV的VP7基因、AKV的N基因和VSV的NP基因序列进行序列分析,设计针对这些基因的特异性探针并标记生物素,分别与不同编号的荧光编码微球偶联后再与这些病毒相应基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪（Liquichip 200）检测荧光信号建立了以上4种虫媒病的快速液相芯片检测方法。检测结果显示,该方法具有较好的特异性,偶联特异性探针的微球只与相应的病毒基因的PCR产物反应,而不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度达到50~100个TCID50。本研究建立了可以同时检测鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、蓝舌病病毒和水泡性口炎病毒的快速高通量液相芯片技术,为其他类似病毒的快速高通量检测提供了借鉴和经验。; 詹爱军王新卫卢体康陈书琨孙洁陈兵曾少灵花群义; 关键词：蓝舌病病毒水泡性口炎病毒

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定: 2009年; 用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5)。其细胞培养上清ELISA效价分别为1∶512和1∶256,腹水ELISA效价分别为1∶512 000和1∶128 000。亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgG1和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L。这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础。; 徐聪杨俊兴花群义阮周曦陶虹段纲郭莹洁陈兵詹爱军; 关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体生物学特性

4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5: 2010年; 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。; 阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎; 关键词：蓝舌病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR

鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：2: 2010年; 为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。; 詹爱军王新卫陈书琨孙洁陈兵阮周曦花群义; 关键词：液相芯片

水疱性口炎研究进展被引量：9: 2007年; 水疱性口炎(VS)是由水疱性口炎病毒(VSV)引起的人畜共患的重大动物疫病。VS病毒生态学复杂,易感动物较多,传播媒介种类广,病毒可在一定区域内长期存在。VSV主要呈嗜上皮性,大量流涎是家畜感染最重要的临床症状,其特征为口腔黏膜、乳房皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂,人感染后出现类似流感的症状。由于其临床症状与口蹄疫不易区别,发病时容易引起国际贸易恐慌,因此,对VS诊断防治的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。文章从分子生物学特征、流行病学、诊断和防控4个方面对水疱性口炎的研究进行了综述。; 孙洪正徐自忠周晓黎董俊花群义高洪范晴江海天; 关键词：水疱性口炎临床症状

鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立被引量：4: 2011年; 为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验。用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒(AKV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)样品,用RT-PCR作对照。结果表明,ELISA具有良好的特异性和敏感性。用夹心ELISA和RT-PCR同时检测128份参考样品,结果表明夹心ELISA的特异性和敏感性分别为100%和96.3%,两种方法的符合率为99.2%。本研究结果为EHDV检测及鹿流行性出血病流行病学调查提供了有效的工具。; 陈兵李健波杨俊兴阮周曦孙洁张彩虹刘建利花群义周晓黎; 关键词：双抗体夹心ELISA 单克隆抗体

水疱性口炎病毒单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定被引量：5: 2010年; 用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均能与VSV反应,且不与其他病毒及BHK细胞反应,表明4株单克隆抗体特异性良好。4株单克隆抗体腹水ELISA效价分别为1∶512 000、1∶256000、1∶256 000、1∶1 024 000。本试验为研究VSV生物学特性和建立VSV免疫学检测方法奠定了基础。; 杨俊兴花群义卢体康吕建强曹琛福阮周曦张彩虹孙洁周晓黎; 关键词：水疱性口炎病毒单克隆抗体生物学特性

鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达被引量：5: 2009年; 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。; 杨俊兴花群义陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红; 关键词：VP7基因基因克隆

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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z445)

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