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蓝舌病病毒荧光定量RT-PCR检测技术被引量：9: 2009年; 蓝舌病是一种侵害反刍动物的虫媒传染病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizooties,OIE)列为上报疾病,我国将其列为一类动物疫病。本研究利用计算机软件分析获取蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)核酸检测的保守靶序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BTV荧光定量RT-PCR技术,进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价,并对动物样品进行检验。结果显示,该技术可有效检出不同血清型BTV,与流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)无交叉反应;对RNA标准品的检测灵敏度为102copies;重复检测CV<5%,可对动物样品进行有效检测。因此,所建立的BTV TaqMan/荧光定量RT-PCR技术可为蓝舌病诊断提供一种快速、可靠的病原检测手段。; 尹惠琼张红刘松婷杨姝史利军张改平章金刚; 关键词：蓝舌病病毒实时定量RT-PCR

鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达被引量：1: 2009年; 为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。; 张红王健王丽席俊易明林张改平章金刚; 关键词：COS7细胞

蓝舌病毒群特异性RT-PCR检测技术及其应用被引量：2: 2008年; 目的:建立一种适于蓝舌病毒(BTV)群特异性基因检测的RT-PCR方法。方法:根据本实验室设计的一对BTVNS1基因通用型检测引物建立BTV群特异性RT-PCR检测技术;对不同血清型BTV及鹿流行性出血热病毒(EHDV)进行检测,验证其特异性;同时,利用该方法检测血清模拟样品及抗病毒血清样品。结果:所设计的检测方法特异性好,与EHDV无交叉反应,可检测至少17个血清型BTV,并能有效检出不同病毒浓度的模拟样品及不同型的血清样品。结论:建立的RT-PCR方法可用于BTV群的特异性通用检测。; 尹惠琼张燕霞孙宇张兰兰孙卫华杨姝李晓成章金刚; 关键词：蓝舌病毒 BTV

群特异性蓝舌病病毒单克隆抗体的制备和鉴定被引量：5: 2008年; 目的:制备群特异性抗蓝舌病病毒(BTV)单克隆抗体,并对其特性进行鉴定,为建立检测BTV抗原及抗体的ELISA方法奠定基础。方法:用纯化的BTV颗粒为免疫抗原免疫BALB/c鼠,以大肠杆菌表达的VP7蛋白作为筛选抗原,用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株;选取抗体效价最高的一株制备BTV单克隆抗体,以该抗体为捕获抗体与8种不同血清型BTV进行ELISA反应,结果与细胞病变反应进行比对;以该抗体为竞争抗体,与12种不同血清型绵羊BTV抗血清进行竞争ELISA反应,并将结果与参比c-ELISA试剂盒结果进行比对。结果:筛选出5株稳定分泌BTV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并选其中一株(3E2)制备了高纯度的单克隆抗体;该单抗用于检测不同血清型BTV,与细胞病变反应结果完全相符;用于检测不同血清型绵羊BTV抗血清,其结果与参比c-ELISA试剂盒符合率为100%,与鹿流行性出血热病毒抗原和抗体均无交叉反应。结论:制备的BTV单克隆抗体具有良好的群特异性,可用于检测不同血清型BTV抗原及BTV抗体。; 杨姝李文超吕茂民尹惠琼马玉媛刘明章金刚; 关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体细胞融合

蓝舌病病毒系列诊断检测技术研究: 蓝舌病(Bluetongue,BT)是一种经吸血昆虫传播,引起反刍动物疫病的急性病毒性传染病,是世界动物卫生组织(OIE)规定的上报疾病(以前为A类传染病)[1],我国将其列为一类动物疫病。蓝舌病对动物和动物制品国际间贸...; 尹惠琼杨姝张立营张红吕茂民李文超张改平章金刚; 关键词：蓝舌病病毒动物疫病病毒检测荧光定量; 文献传递

蓝舌病毒核酸检测技术研究进展被引量：2: 2008年; 蓝舌病毒(BTV)血清型较多,其核酸检测主要涉及通用型检测和分型检测,寻求相应的适宜检测靶基因尤为重要。BTV核酸检测技术是蓝舌病诊断的重要手段,其发展过程主要经历了基因杂交探针技术、RT-PCR检测技术、实时荧光定量PCR检测技术及基因芯片检测技术等;同时,建立和完善高通量BTV筛查技术成为迫切要求。; 尹惠琼章金刚; 关键词：蓝舌病毒 RT-PCR 实时荧光定量PCR 基因芯片

生物条形码:一种新的痕量蛋白检测技术被引量：2: 2008年; 目前，蛋白质的痕量检测仍存在一定的困难，一个最主要的原因是缺乏像检测核酸的PCR那样高灵敏度的、可对目标蛋白进行扩增的技术。2003年，美国科学家Mirkin领导的课题组首次报道了生物条形码检测技术（bio-bar codes assay，BCA），可以对痕量蛋白进行检测。与临床上常规的ELISA法检测相比，其检测灵敏度可达它的106倍。本文针对BCA检测系统的技术要点和发展前景进行了简要综述。; 张立营李德雪章金刚; 关键词：蛋白质条形码 ELISA法检测美国科学家

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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z446)