国家重点实验室开放基金(NKLVB200801)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：周建华罗军荣马学恩刘霄卉余群英更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所内蒙古农业大学江西农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学理学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2009年
- 绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性PCR检测法及套式PCR检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。
- 罗军荣刘霄卉余群英张淑琴周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒套式PCR
- 羊Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 为改进羊肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离和培养技术,本研究采用IgG黏附法结合磁化树脂微粒法分离纯化了山羊肺泡Ⅱ型上皮细胞,碱性磷酸酶染色检查表明Ⅱ型细胞占90%以上,台盼蓝染色活细胞为95%以上。羊肺泡Ⅱ型上皮细胞分离纯化方法的建立,为今后体外分离培养绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的探索性工作奠定了基础,也为研究肺纤维化及肺癌发病机理等重大课题提供了重要的技术支持。
- 罗军荣余群英刘霄卉高华武志红周艳喜周建华马学恩
- 绵羊肺腺瘤LAMP快速诊断方法的初步建立(英文)被引量：2
- 2013年
- 为了建立一种便捷、灵敏的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)检测技术,本研究根据exJSRV LTR设计2对特异性引物,建立JSRV的LAMP(loop-mediated isothermal amplification,环介导等温扩增)检测方法,对反应体系中的MgSO4Betaine Bst DNA PoLymerase dNTP引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特异性试验。结果表明:所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用60min即可得到其特有的阶梯状条带,而且对内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)的扩增结果为阴性,该方法对JSRV前病毒DNA的最小检测限为10拷贝,灵敏性高于一步PCR方法。LAMP和特异性PCR及套式PCR方法检测临床样品的符合率分别为92%和100%。该方法为绵羊肺腺瘤病的临床检测和基层检疫提供了一种简便、实用的方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。基于本技术的专利已获国家知识产权局批准(专利号ZL 2012 1 0274280.7)。
- 刘霄卉于立新罗军荣周艳喜刘畅幺宏强周建华马学恩
- 关键词：环介导等温扩增绵羊肺腺瘤病毒敏感性
