天津市高等学校科技发展基金计划项目(20060207)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李晓霞王宝利张镜宇胡丽玲张珊珊更多>>
- 相关机构：天津医科大学代谢病医院天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目天津市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- BMP2与BMP7嵌合表达产物可诱导成骨细胞分化被引量：4
- 2009年
- 目的:构建骨形态发生蛋白(BMP)2与BMP7嵌合表达的分泌型基因载体pcDNA3-BMP2/7,检测表达产物的成骨诱导活性。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增BMP2与BMP7的成熟肽编码基因,利用重叠延伸PCR以柔性肽(Gly4Ser)3编码序列使两者嵌合并克隆到质粒pcDNA3/sec上,转染CHO-K1细胞筛选得到稳定克隆,以其条件培养基处理鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2,通过RT-PCR研究BMP2/7嵌合表达产物的活性。结果:BMP2/7嵌合表达产物可以明显提高C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(Alkalinephos phatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,Oc)成骨细胞表型基因以及特异性转录因子Runx2(runt-related transcription factor2)mRNA的表达(P<0.01)。结论:制备的BMP2/7嵌合表达产物能够形成异源二聚体,诱导非骨源性细胞向成骨细胞分化。
- 胡丽玲李晓霞张镜宇王宝利
- 关键词：骨形态发生蛋白质类成骨细胞细胞分化
- 乳腺癌细胞通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1基因表达被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨乳腺癌细胞分泌的甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对成骨细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因表达的调节作用。方法:首先将10-8mol/L剂量的PTHrP(1-34)作用于成骨细胞UMR106,同时设立对照组,半定量RT-PCR法分析对不同时间成骨细胞的MCP-1mRNA表达;之后构建PTHrP受体(PTH1R)的shRNA重组质粒PTH1R/pRNAT,将其转染至成骨细胞UMR106,建立稳定表达的细胞系PTH1R/UMR106;将乳腺癌细胞MDA-MB231条件培养基(CM)分别作用于UMR106和PTH1R/UMR106,半定量RT-PCR法测定MCP-1的mRNA表达。结果:PTHrP可以促进成骨细胞MCP-1的表达,起始于3h,6h到达高峰(P<0.05)。乳腺癌细胞CM作用UMR106成骨细胞6h后,MCP-1表达水平也较未处理组明显升高(分别为1.2381±0.1155和0.5984±0.0364,P<0.05),而采用RNA干扰技术敲减PTH1R表达后,乳腺癌细胞CM对成骨细胞MCP-1表达的作用明显减弱(降低至0.8672±0.0457,P<0.05)。结论:乳腺癌细胞可通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1。
- 张珊珊李晓霞王宝利
- 关键词：甲状旁腺素蛋白质类成骨细胞
- 人肿瘤坏死因子受体的配体胞外段的原核表达及分析
- 2009年
- 新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为Osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人GITRL胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶Eco31I获得大肠杆菌偏嗜性GITRL的胞外段cDNA序列,构建了基于pQE-30Xa的原核表达载体,并在M15[pREP4]菌株中经IPTG诱导表达带有His融合标签的GITRL重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经体外包涵体变性、复性及纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting进行分析和鉴定。同时建立了报告基因技术检测GITRL重组蛋白生物活性的方法,简单便捷、灵敏而且周期短,利用此方法分析了重组GITRL胞外段表达蛋白的生物活性。
- 焦艳丽郑纺李晓霞王宝利郭善一
- 关键词：原核表达报道基因
