重庆市卫生局医学科研项目(2012-1-096)
- 作品数：12 被引量：25H指数：3
- 相关作者：李晶封玉玲赖国旗严磊苗加伟更多>>
- 相关机构：重庆三峡医药高等专科学校重庆医科大学重庆三峡中心医院更多>>
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- 血液中花生四烯酸乙醇胺含量与精神分裂症发病机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的分析精神分裂症患者血液中花生四烯酸乙醇胺(AEA)含量的变化,探讨与精神分裂症病理之间的联系。方法采集56例精神分裂症患者静脉血液样本,应用高效液相色谱法(HPLC)柱前衍生化测定精神分裂症患者血液样品中AEA含量变化;并与40例健康者血液中AEA含量进行比较。结果精神分裂症患者血液中AEA含量明显高于对照组[(23.87±1.32)ng/mL vs(11.26±0.81 ng/mL)],两组样本间差异有统计学意义(P<0.05)。结论精神分裂症患者症状活跃期间血液中AEA含量增高,可能与精神分裂症的发病机制有关,该结果为精神分裂疾病药物研发提供新思路。
- 封玉玲封海涛周海红赖国旗李晶
- 关键词：精神分裂症高效液相色谱血浆
- 人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡被引量：3
- 2015年
- 目的构建人2型大麻素受体(h CB2R)基因真核表达载体,探讨h CB2R在细胞中的表达、定位以及h CB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与h CB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99%;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡。结论上调Caski细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。
- 严磊李晶赵婷婷王会娟赖国旗
- 关键词：HEK293细胞宫颈癌细胞
- 上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡
- 2016年
- 目的:通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(human cannabinoid receptor 2,hCB2R)对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法:选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-h CB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞,Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测h CB2R表达及细胞内定位;流式细胞术检测He La细胞凋亡,Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:与空质粒转染组相比,GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白,且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达;GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[(14.51±4.51)%vs(6.29±0.57)%,t=1.72,P<0.05];与空质粒对照组相比,h CB2R转染组细胞内Bax和Bad的表达水平明显上调(P<0.05),而Bcl-2的表达明显下调(P<0.05)。结论:hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关。
- 谭晓玲李晶钟序素
- 关键词：HELA细胞子宫颈癌细胞细胞凋亡
- 大鼠CB1基因真核表达载体的构建及初步鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的:构建大鼠Ⅰ型大麻素受体(CB1)真核基因表达载体,并检测其在细胞中的表达情况。方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出CB1基因片段,产物连接到p MD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆,经Eco RⅠ、Bam HⅠ双酶切及测序鉴定后,将其连接到载体pc DNA 3.1(+)中,构建质粒载体pc DNA3.1(+)-CB1,脂质体转染原代人胚肾293细胞(HEK293细胞)。用Western blot实验鉴定细胞中CB1蛋白的表达,用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位。结果:采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因,PCR扩增得到1 500 bp左右的CB1基因片段,双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pc DNA3.1(+)-CB1构建成功。Western blot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pc DNA3.1(+)-CB1能在HEK293细胞中表达,且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中。结论:构建的pc DNA3.1(+)-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞,并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白。
- 刘佳李晶严磊赵婷婷王慧娟赖国旗龙明
- 关键词：质粒载体
- 人低分化结肠癌SW480细胞内、外液中醋酸甲羟孕酮含量分析被引量：2
- 2014年
- 结肠癌（colon cancer）好发于直肠与乙状结肠交界处,发病率占胃肠道肿瘤第3位.醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate,MPA）用于临床治疗乳腺癌及其他激素依赖性肿瘤,但目前尚无研究关于MPA在细胞内、外液浓度分布的报道.本实验通过构建反相高效液相色谱法（RPHPLC）分析低分化人结肠癌SW480细胞内、外液MPA含量,为研究其诱导结肠癌细胞凋亡与药物在细胞间分布关系提供一种技术,也可作为研究同类激素药物代谢动力学的方法.
- 封玉玲陈杰苗加伟赖国旗贾爽爽李晶
- 关键词：醋酸甲羟孕酮SW480人结肠癌细胞内低分化孕酮含量
- 表没食子儿茶素没食子酸酯减轻LPS诱导新生大鼠原代神经胶质细胞损伤
- 2015年
- 目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对细菌脂多糖(LPS)所致大鼠神经胶质细胞炎症的保护作用。方法取新生乳鼠原代神经胶质细胞培养,用LPS激活小胶质细胞引起炎性反应。高效液相色谱检测细胞兴奋性/抑制氨基酸含量,用酶联免疫吸附实验(ELISA)和蛋白免疫印记试验(Western blot)检测炎性因子蛋白含量。结果 LPS激活神经小胶质细胞,大幅上调TNF-α、IL-1β及IL-8炎性因子和升高i NOS蛋白质水平(P<0.05),EGCG明显抑制这些炎性因子的过度产生(P<0.05),同时还显著降低Glu和升高γ-GABA的浓度(P<0.05)。结论EGCG能减弱LPS引起的体外培养神经胶质细胞的炎性反应。
- 龙明李晶封玉玲龚明董志
- 关键词：EGCG
- 高脂喂养SD大鼠体内花生四烯酸乙醇胺水平及Ⅰ型大麻素受体表达的变化被引量：2
- 2016年
- 目的探讨高脂饮食诱导肥胖SD大鼠脂肪代谢紊乱对内源性大麻素系统(endocannabinoid system,ECS)的影响及其机制。方法建立高脂饮食诱导肥胖SD大鼠模型,每周称量大鼠体重;采用酶比色法测定大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平;高效液相色谱法检测大鼠血浆中大麻内源性配体花生四烯酸乙醇胺(anandamide,AEA)的含量;Western blot法检测大鼠附睾脂肪组织中Ⅰ型大麻素受体(cannabinoid receptorⅠ,CB1)的表达。结果大鼠经高脂饮食持续喂养8周,体重均不同程度增加;血清中TC、TG、LDL-C和血浆中AEA水平均显著升高(P<0.05);附睾脂肪组织中CB1的表达量也显著增加(P<0.05)。结论通过高脂饲料成功诱导SD大鼠的TC、TG和LDL-C升高,使大鼠产生高脂血症;大鼠血清AEA水平和血浆中CB1表达的显著变化表明肥胖大鼠体内ECS在肥胖过程中发生了显著改变,本研究在一定程度上建立了ECS与肥胖之间的联系。
- 陈华龙明封玉玲赖国旗李晶
- 关键词：肥胖
- 大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的构建大鼠CB1(r CB1)基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与p CDNA 3.1(+)质粒,构建pc DNA3.1(+)-r CB1。脂质体法将其转染到HEK293和Ca Ski细胞,Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测r CB1的表达及定位,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot与实时荧光定量PCR检测r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段,测序结果和r CB1基因序列(NM_012784.4)一致。转染HEK293细胞后,r CB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染Ca Ski细胞后,r CB1使细胞凋亡率增加(P<0.05);r CB1基因上调Bax、Bad的表达,同时抑制Bcl-2的表达,与空白组比较,其差异具有显著性(P<0.05)。结论成功构建了pc DNA3.1(+)-r CB1真核表达载体,r CB1表达于细胞膜和细胞质,r CB1可以明显促进宫颈癌Ca Ski细胞凋亡,其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。
- 严磊李晶赵婷婷王会娟王蕾赖国旗
- 关键词：HEK293细胞CASKI细胞细胞凋亡
- 人2型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的研究
- 2016年
- 目的通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(h CB2R)对人宫颈癌He La细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染He La细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测h CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 h CB2R转染He La细胞后表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,细胞膜和细胞质中均有h CB2R表达;过表达的h CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示细胞株呈现凋亡,h CB2R对宫颈癌He La细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌He La细胞凋亡。结论上调He La细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。
- 贾爽爽代玲
- 关键词：宫颈癌细胞细胞凋亡
- 牛黄解毒片的安全性评价被引量：11
- 2014年
- 含雄黄的牛黄解毒片用于临床已有800余年历史,但由于雄黄含砷,近年来国内外对其关注度高、争议大。对含雄黄的传统中成药而言,目前存在2个认识误区,其一是把雄黄毒性与砒霜相提并论,其二将雄黄贬得一无是处,可有可无,要求从复方中将其去除。含雄黄的牛黄解毒片到底有多毒?该文结合牛黄解毒片的研究进展对此作一综述,并提出不同见解:①以总砷为标准评价含雄黄中药的安全性不妥;②雄黄的服药量和服药时间的长短决定其毒性的大小;③雄黄是中药复方中的有效成分之一,应作深入研究来决定其取舍。对诸如牛黄解毒片等所含雄黄中成药的经典方剂,应该以严谨的现代科学依据加以评价,才能指导合理、安全应用。
- 封玉玲苗加伟李晶孙安盛刘杰
- 关键词：牛黄解毒片雄黄砷传统中药安全性评价
