国家自然科学基金(81273423)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 靶向EGFR二聚化界面单链抗体的构建及表达
- 2019年
- [目的]构建靶向EGFR二聚化界面的单链抗体。[方法]构建单链抗体的基因并进行密码子优化,克隆于表达载体p GAPZα-A和毕赤酵母X-33。镍柱纯化目的蛋白,并对EGFR高表达细胞A431和EGFR正常表达细胞NIH-3T3进行体外抑制分析和抗磷酸化分析。[结果]纯化获得了分子量大小约29. 0 k Da的EGFR dimer Sc Fv蛋白。在48h体外抑制实验中,534 nmol/L EGFR dimer Sc Fv对A431和NIH-3T3的抑制率分别为34. 92±1. 30%和5. 89±0.46%,抑制作用与母本抗体相似。Western Blotting分析表明,EGFR dimer Sc Fv能显著抑制A431细胞EGFR磷酸化,而对NIH-3T3细胞显著无抑制作用。[结论]初步验证了靶向EGFR二聚化界面的单链抗体作为新型抗体药物的可行性,为后续研究奠定了基础。
- 李泽民赵林邓栩文祝贺邱创楠温碧燕刘梦苗李黄金
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体肿瘤
- 靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR^(262-328)的构建及免疫原性分析被引量：2
- 2013年
- 目的构建靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328并分析其免疫原性。方法采用重叠延伸PCR来扩增P64k-EGFR262-328融合基因,克隆至pMD18-T,经测序鉴定后与pET-21b构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。目的蛋白经IPTG诱导表达后用Source Q阴离子层析和Ni-NTA亲和层析纯化,纯化的融合蛋白乳化后免疫BALB/c小鼠分析其免疫原性。结果获得了2 031 bp的融合基因,IPTG诱导后获得了相对分子质量(Mr)70 000大小的目的蛋白,经两步柱层析后,融合蛋白达到了95%以上的纯度,并在小鼠体内产生了高达1∶16 000以上的抗体滴度。结论成功制备了肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328。
- 赵林吴梅芝陈展歌李黄金周联
- 关键词：EGFR肿瘤疫苗免疫原性
- 抗表皮生长因子受体3(HER3)单链抗体的制备及鉴定
- 2019年
- 目的表达、纯化并鉴定抗人表皮生长因子受体3(HER3)的单链抗体(scFv).方法从NCBI查找抗HER3单克隆抗体UM716的轻链和重链序列,构建抗HER3-scFv基因;利用毕赤酵母组成性表达载体pGAPZαA构建重组表达载体,电转化毕赤酵母,筛选高表达工程菌;工程菌发酵上清经疏水层析和金属离子亲和层析纯化,Weslem blot法和ELISA鉴定纯化产物.结果成功构建了抗HER3-scFv基因,获得了高表达工程菌;发酵上清经两步层析纯化,获得了纯度达95%以上的抗HER3-scFv,产率为192mg/L;Western blot结果显示抗HER3-scFv得到正确表达,ELISA结果表明抗HER3-scFv可特异识别HER3.结论成功制备了特异的抗HER3-scFv.
- 刘梦苗何佩彦温碧燕邱创楠李黄金赵林
- 关键词：纯化
