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乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测方法的建立被引量：1: 2013年; 目的建立人血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记HBV-LP单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为5ng／ml，批内、批间变异均小于10％。在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了血清中HBV—LP的检测方法，该方法性能能够满足临床检测的需求。; 赵静马洪滨侯俊郭静霞徐军宋永继陈霖刘爱霞刘佳魏红山李伯安; 关键词：酶联免疫吸附测定病毒包膜蛋白质类

高尔基体蛋白73原核表达系统的构建及单克隆抗体的制备被引量：4: 2013年; 目的克隆、表达高尔基体蛋白73（GP73），并制备单克隆抗体。方法用逆转录聚合酶链反应法从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增GP73编码序列，将产物与pQE31载体连接，转化人大肠埃希菌BL21，诱导表达后通过His标签进行纯化，用纯化后的蛋白免疫BALB／c小鼠，采用常规的细胞融合技术制备单克隆抗体，并对其进行鉴定。结果重组载体经序列分析与报道序列同源性100％，并获得了重组蛋白。筛选出5株能稳定分泌抗GP73的单克隆抗体杂交瘤细胞株，免疫球蛋白类型有2株为IgGl类。WesternBlot印迹显示这些单抗能特异结合GP73蛋白。结论成功构建了人高尔基体蛋白73原核表达体系，并获得了单克隆抗体。; 郭静霞魏红山宋永继赵静刘爱霞刘佳陈霖徐军李伯安毛远丽; 关键词：高尔基体肝肿瘤

高尔基体蛋白73定量检测方法的建立被引量：4: 2013年; 目的建立人血清中高尔基体蛋白73（GP73）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记GP73单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、线性范围、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为18．5ng／ml，线性范围为25～500ng／ml，批内、批间变异均〈10％。检测GP73临床高、中、低值血清回收率为分别为95．3％、92．6％和103．7％；在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了定量检测血清中GP73的方法，该方法能够满足临床检测的需球。; 侯俊郭桐生赵静刘爱霞宋永继郭静霞刘佳陈霖徐军魏红山李伯安; 关键词：酶联免疫吸附测定高尔基体肝肿瘤

肝细胞脂肪变对血清糖蛋白GP73水平的影响被引量：8: 2013年; 目的观察不同病因肝细胞脂肪变对肝病患者血清GP73水平的影响。方法以100例健康体检者为对照，观察178例肝穿刺病理学检查发现肝脂肪变性患者的血清GP73水平差异。结果与健康对照人群（35．61±12．22ng／m1）相比，不同病因导致的脂肪肝患者（70．62±60．60ng／m1）血清GP73显著升高。尽管酒精性脂肪肝（81．86±47．82ng／m1）和急性肝损伤患者合并肝细胞脂肪变（82．77±77．73ng／m1）血清GP73水平略高于慢性乙型肝炎患者（63．84±50．62ng／ml）和非酒精脂肪肝患者（65．75±62．20ng／ml），但不同病因导致的肝细胞脂肪变并未显示血清GP73水平差异有统计学意义。更为重要的是，68例，≥1．0（71．46±66．48ng／ml），75例F≥2．0（69．58±62．31neVml），以及34例F3·F4的患者（71．65±43．89ng／ml），血清GP73的水平差异无统计学意义（F=0．02，P=0．98）。相反，显著性肝纤维化S〉-2患者（91．04±82．37ng／m1）其血清GP73水平显著高于纤维化轻微S〈2（65．80±53．45ng／m1）的患者（P=0．029）。结论肝细胞脂肪变导致血清GP73水平显著升高，但肝细胞脂肪变的程度似乎与血清GP73水平无关。; 魏红山康艳芳郝晓花刘佳李红敏刘爱霞任慧黄玉波李伯安; 关键词：高尔基体脂肪肝肝炎生物学标记

血清标志物GP73在原发性肝癌诊断中的作用被引量：7: 2013年; 目的分析GP73在原发性肝癌诊断中的作用，探讨血清GP73和AFP联合检测对原发性肝癌诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测60例体检正常者（正常对照）、178例慢性肝炎或肝硬化（CH／LC）患者和194例原发性肝癌（PHC）患者血清中的GP73，同时采用电化学发光法检测血清中AFP的水平。结果经Kruskal—Wallis检验正常对照组、CH／LC组和PHC组GP73表达水平的差异有统计学意义（P〈0．001）且PHC组的GP73水平明显高于CH／LC组（P〈0．001）。以ROC曲线确诊PHC的GP73临界值为190．7ng／ml，AFP的临界值为35．2ng／ml，单项检测时，GP73的敏感度和特异度分别为66．5％和86．6％，AFP的敏感度与特异度分别为58．8％和83．7％。GP73和AFP联合检测时敏感度与特异度分别为85．6％和81．5％。结论GP73对PHC的诊断有较好的敏感度和特异性，血清GP73联合AFP检测能够有效地提高PHC的诊断效率。; 陈霖刘振红徐军刘佳郭静霞赵静宋永继刘爱霞张岚戴亮毛远丽李伯安; 关键词：高尔基体甲胎蛋白类肝肿瘤

亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立被引量：3: 2013年; 目的利用小扁豆凝集素（LCA）建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3（AFP—L3）的纯化方法。方法采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素，偶联到活化的琼脂糖凝胶4B（sephrose4B）上，灌注离心柱，制备AFP—L3亲和吸附离心管。血清加入离心管后经吸附和洗脱，便可获得纯化的AFP—L3。随机选取10例AFP阳性患者血清，应用亲和吸附纯化法纯化AFP．L3后应用电化学发光法检测，并与传统的亲和免疫电泳方法相比较。结果10例患者血清经纯化后，AFP-L3检测结果有8例〉5ng／ml，亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应。结论成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP—L3的方法，该方法具有较高的灵敏度，重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用。; 宋永继侯俊徐军刘爱霞刘佳赵静郭静霞李靖闫静肖李伯安毛远丽; 关键词：甲胎蛋白类凝集素类

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“首都临床特色应用研究”专项(Z111107058811068)