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野生稻基因组抗性基因富集文库的构建被引量：2: 2008年; 通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。; 曹孟良李磊韩小霞田志坚邢俊杰李强崔玲玲张朝良李玲龙罗秀娟杨志刚李丁谢灵灵陶小平罗泽宇唐丽; 关键词：野生稻富集文库新基因克隆

优化菌落原位杂交体系筛选野生稻基因组文库被引量：3: 2008年; 菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号的强弱很清晰地显色阳性黑点.采用该法筛选野生稻基因组文库,已筛选出22个阳性克隆,并测序分析均为阳性克隆.; 陶小平李磊李强韩小霞邢俊杰崔玲玲李玲珑张朝良张秋平曹孟良; 关键词：基因组文库溶菌酶阳性克隆

携带大片段BIBAC克隆在不同农杆菌中的遗传稳定性研究被引量：1: 2006年; 大片段克隆在农杆菌中的稳定性是利用可转化大片段载体进行农杆菌介导遗传转化的关键问题.选用插入片段分子质量分别为150kb和50kb的BIBAC克隆,测定了在3种农杆菌AGL-1,EHA105和LBA4404中的遗传稳定性.从第1、3、5次继代培养的农杆菌中抽提的质粒及酶切结果显示,由于农杆菌背景质粒的干扰,难以判断质粒的降解与否.将农杆菌质粒再转化到大肠杆菌宿主中,发现来自农杆菌AGL-1和EHA105的质粒出现了明显的降解,片段变小,而来自农杆菌LBA4404的质粒没有变化.结果表明,大片段BIBAC质粒在不同农杆菌菌株中的稳定性不同,在农杆菌LBA4404中比较稳定,适合用于遗传转化.; 邢俊杰杨剑梁铃李强李磊张朝良杲修杰曹筑荣曹孟良; 关键词：根癌农杆菌

东乡野生稻NBS-LRR类抗性基因同源序列的分离与鉴定被引量：4: 2008年; 基于植物的抗性基因具有保守序列,根据已克隆基因的保守序列设计探针,利用菌落杂交的方法,对东乡野生稻大片段基因组文库进行筛选,得到两个候选克隆。序列比对发现其中含有NB-ARC的保守序列,可用于后续转基因鉴定。; 王正华杲修杰曹孟良; 关键词：NBS-LRR 抗性基因基因组文库

可转化人工染色体文库研究进展被引量：2: 2006年; 综述了可转化人工染色体(transformation-competent artificial chromosome,TAC)载体的发展、TAC文库的构建程序及TAC载体系统在植物基因克隆中的应用。; 曹筑荣王正华曹孟良; 关键词：可转化人工染色体基因组文库图位克隆

植物抗病基因研究进展被引量：4: 2006年; 目前人们已经克隆了50多个植物抗病基因,大部分植物抗病基因结构中存在高度保守的区域。对植物抗病基因的克隆方法、结构特征及作用机制进行了综述,并简述了生物信息学在植物抗病基因研究中的应用。; 杲修杰王正华曹孟良; 关键词：抗病基因保守序列克隆生物信息学

东乡野生稻双元细菌人工染色体(BIBAC)文库的构建被引量：4: 2006年; 双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成,平均插入片段大小为65kb,覆盖率为2倍基因组。稳定性检测结果表明,东乡野生稻基因组DNA能够在BIBAC载体中稳定存在。; 成志伟曹筑荣陈良碧曹孟良; 关键词：东乡野生稻基因组 DNA

野生稻可转化基因组文库的构建被引量：2: 2007年; 利用广泛应用于水稻转化的双元载体pCAMBIA1301构建了二倍体东乡野生稻和四倍体小粒野生稻可转化基因组文库,插入片断长度分别为9.54kb和13.3kb,稳定性实验证明含20kb插入片断的文库质粒可以稳定遗传,较长插入片断的文库质粒在农杆菌中的稳定性较差。; 李磊李强崔玲玲李玲龙罗赫荣曹孟良; 关键词：野生稻稳定性

三种野生稻候选抗病基因的克隆与分析被引量：8: 2007年; 候选抗性基因克隆策略是克隆植物新抗性基因的重要途径。根据已知NBS-LRR类抗病基因结构中的氨基酸保守区域,设计兼并引物,通过RT-PCR扩增、克隆和测序,从茶陵野生稻,东乡野生稻和小粒野生稻中共获得了11条NBS-LRR类抗病基因同源序列。通过聚类分析可将同源序列分为3类,其中茶陵野生稻中得到1类,东乡野生稻中得到2类,而小粒野生稻中得到3类。但是小粒野生稻包含有其他两种野生稻的序列。三类序列都与水稻抗病基因RPR1具有较高的同源性,有一类氨基酸序列同源性甚至高达88%,可能为其家族成员。利用电子定位将三类序列定位在水稻基因组11号染色体上RPR1附近。根据序列比对分析结果认为其中可能有1～2个新抗病基因。; 李强李磊田志坚邢俊杰崔玲玲曹孟良; 关键词：野生稻 RT-PCR

小粒野生稻可转化人工染色体文库初步构建及筛选被引量：2: 2008年; 以小粒野生稻核DNA为材料构建了一个可转化人工染色体文库,获得了5000个克隆,平均插入片段约45 kb。稳定性检测结果表明,小粒野生稻基因组DNA能够在TAC载体中稳定存在。基于已克隆抗性基因的保守序列设计探针,利用菌落杂交的方法,对文库进行筛选。结果表明,该文库可以用于抗性基因的筛选。; 王正华曹筑荣曹孟良; 关键词：可转化人工染色体基因组文库小粒野生稻

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