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四川省应用基础研究计划项目(05JY029-007-5)

作品数：10 被引量：37H指数：3
相关作者：岳华汤承杨发龙李定霏黄兴更多>>
相关机构：西南民族大学成都农业科技职业学院中国动物卫生与流行病学中心更多>>
发文基金：四川省应用基础研究计划项目“十一五”国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 7篇农业科学
  • 4篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 5篇病毒
  • 4篇鸡胚
  • 4篇鸡胚成纤维
  • 4篇鸡胚成纤维细...
  • 3篇荧光
  • 3篇RNA干涉
  • 2篇荧光定量
  • 2篇载体介导
  • 2篇腺病
  • 2篇腺病毒
  • 2篇腺病毒载体
  • 2篇腺病毒载体介...
  • 2篇介导
  • 2篇克隆
  • 2篇Β防御素
  • 2篇PCR
  • 2篇RNA干扰
  • 2篇病毒载体
  • 2篇病毒载体介导
  • 1篇蛋白

机构

  • 10篇西南民族大学
  • 3篇成都农业科技...
  • 2篇中国动物卫生...
  • 1篇河南农业职业...
  • 1篇四川省兽药监...
  • 1篇成都市农林科...

作者

  • 10篇岳华
  • 7篇汤承
  • 4篇黄兴
  • 4篇李定霏
  • 4篇杨发龙
  • 3篇马莉
  • 3篇傅安静
  • 2篇张焕容
  • 2篇李明义
  • 2篇刘海燕
  • 1篇于学辉
  • 1篇景波
  • 1篇谢青
  • 1篇马丽
  • 1篇朱金凤
  • 1篇张平
  • 1篇孟宇航
  • 1篇范根成
  • 1篇周光荣
  • 1篇邓书

传媒

  • 2篇黑龙江畜牧兽...
  • 2篇西南民族大学...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇河南农业大学...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国预防兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医

年份

  • 1篇2016
  • 1篇2011
  • 1篇2010
  • 3篇2008
  • 3篇2007
  • 1篇2005
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
鸡β防御素Gal-2基因的克隆及序列分析被引量：3
2016年
为了研究不同品种或品系鸡β防御素Gal-2基因，试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物，采用RT—PCR技术从宝万斯尼拉、罗曼粉、山地乌骨鸡、大恒优质肉鸡配套系A、B骨髓细胞中扩增出Gal-2基因，经PCR和酶切鉴定后测序，并采用DNAStar软件进行生物信息学分析。结果表明：成功克隆出5个品种（品系）Gal-2基因，5个编码区核苷酸序列同源性为100％。与GenBank中鸡β防御素Gal-2编码区核苷酸序列同源性为97．4％-100％，说明鸡B防御素Gal-2尽管高度保守，但不同地方品种间仍然存在遗传多样性。
刘海燕岳华
关键词：Β防御素克隆
腺病毒载体介导的GFP在鸡胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉被引量：3
2008年
鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞;结果证明0.1-2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞;胞核与胞浆可见明亮的荧光;荧光细胞数量及荧光强度在24～36h达到高峰;以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示;Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响;说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达;干涉效率为85%;证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制;为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础.
傅安静汤承李定霏谢青岳华
关键词：RNA干涉腺病毒载体鸡胚成纤维细胞
山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建被引量：1
2011年
为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。
刘海燕岳华汤承杨发龙张焕容黄兴张平周光荣
关键词：山地乌骨鸡Β防御素克隆酵母
腺病毒载体介导的GFP基因在鸭胚成纤维细胞中的表达及RNA干扰
2008年
目的:建立在鸭胚成纤维细胞(DEF)中进行RNA干扰(RNAi)的技术平台,为鸭基因组功能的研究提供新的技术手段。方法:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,脂质体转染化学合成的GFP特异小干扰RNA(GFP-siRNA),用流式细胞仪测定GFP-siRNA对重组腺病毒(Adv-GFP)介导的GFP基因在DEF中表达的干扰效果。结果:200MOI(感染复数)Adv-GFP介导的GFP基因在DEF中表达效率最高,为31.20%±3.11%,对DEF的活力无明显影响;GFP-siRNA能有效干扰GFP基因在DEF中的表达,相对抑制率为98.56%。结论:在DEF中进行RNAi是可行的,Adv-GFP是介导外源基因在DEF中表达较为理想的载体;首次建立了在DEF中进行RNAi的技术平台,为鸭基因组的功能等研究提供了新的技术手段。
孟宇航汤承杨发龙邓书岳华于学辉
关键词：鸭胚成纤维细胞RNA干扰腺病毒载体绿色荧光蛋白
RNAiFect^(TM)和SuperFect转染试剂对4种细胞活性的影响被引量：2
2005年
在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但因转染试剂对细胞有一定的毒性作用,超过一定用量可以引起细胞形状改变、脱落、甚至死亡,直接影响着干涉的效率,所以确定转染试剂的优化用量,是RNA干涉试验中的重要环节.将不同用量的RNA iFectTM和SuperFect两种转染试剂分别加入鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞中,在4h和24h后观察细胞的活力情况,比较了不同转染试剂对不同细胞的影响.结果表明:相同用量的两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长的影响远远小于对CEF细胞的影响;两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3u l;两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染.
李定霏岳华傅安静马莉黄兴
关键词：鸡胚成纤维细胞293细胞MDCK细胞毒性
短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖被引量：9
2007年
以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础.
岳华汤承李定霏傅安静马丽
关键词：RNA干涉新城疫病毒鸡胚成纤维细胞鸡胚
纳米佐剂的研究进展被引量：3
2010年
自从纳米材料诞生以来,就因其特殊功效而备受瞩目。纳米材料在医学领域中的应用十分广泛,用纳米材料研制疫苗佐剂已成为当前研究的热点。作者从目前常用免疫佐剂存在的问题、纳米佐剂的概念、纳米佐剂的研究进展、前景和展望共4个方面概述了近年来国内外纳米佐剂研究所取得的成果。
黄兴岳华
关键词：纳米材料佐剂免疫
鸭瘟病毒在雏鸭体内的动态定量分布及其潜伏部位研究被引量：8
2007年
为研究鸭瘟病毒的组织细胞嗜性及其潜伏部位,采用real-timePCR技术对人工感染后病毒的组织器官分布进行了动态定量分析。结果表明,鸭瘟病毒在肝、脾、外周血淋巴细胞、法氏囊、三叉神经节、肾、肺和心脏等均能增殖;动态定量分析发现,随疾病发展各器官病毒荷载量不断上升,至死亡时达到顶峰;肝、脾中病毒载量高,出现时间早,持续时间长;耐过鸭多数组织器官中病毒逐渐消失,但三叉神经节及外周血淋巴细胞在感染后38d仍能检测到低拷贝病毒DNA,表明除三叉神经节外,外周血淋巴细胞也很可能是潜伏部位。
岳华杨发龙景波汤承张焕容
关键词：鸭瘟病毒鸭瘟REAL-TIMEPCR
荧光定量RT-PCR检测鸡CD4、CD8基因表达水平被引量：10
2008年
白细胞分化抗原CD4和CD8在机体免疫应答及其信号传递过程中发挥着重要作用。本试验建立了定量检测鸡CD4和CD8 mRNA表达水平的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法,并采用该方法对26-50日龄商品鸡外周血淋巴细胞（PBL）中CD4和CD8 mRNA表达水平进行了检测。结果显示：所建立的RRT-PCR对CD4和CD8 mRNA的扩增效率分别为93%和91%;线性范围分别在10^-4-10^-9和10^-3-10^-9;相关系数分别为0.998 0和0.999 9;最低分别能检测105和120拷贝;熔解曲线分别在78.2和86.7℃附近出现1个单特异峰;组内变异系数分别在1.13%-2.15%和1.17%-3.68%,组间变异系数分别在1.16%-3.25%和1.66%-2.86%。26-50日龄鸡PBL CD4和CD8的mRNA表达水平有小幅波动,与采用流式细胞术检测结果的报道一致。本试验建立的RRT-PCR方法敏感性高、稳定性和再现性好,为检测鸡CD4、CD8基因表达水平提供了精确定量的新方法。
岳华黄兴杨发龙李明义范根成马莉汤承
关键词：荧光定量RT-PCRCD4CD8MRNA
siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达被引量：2
2007年
用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.
马莉朱金凤汤承李明义李定霏岳华
关键词：RNA干涉SIRNA禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR鸡胚成纤维细胞
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