国家自然科学基金(30840069)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：林旭林万松郭如意苏智军李志军更多>>
- 相关机构：福建医科大学福州市第一医院更多>>
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- 全基因组分析乙型肝炎病毒缺失变异及其与干扰素疗效的关系
- 2011年
- 干扰素是治疗慢性乙型肝炎（CHB）的主要药物之一,但其有效率仅为20%～40%.研究显示,HBV一些特定位点的变异具有抵抗干扰素的作用,这些位点的变异虽然可以抵抗干扰素的作用,但不足以说明干扰素抵抗的机制.目前大多数研究是以HBV的部分片段或特定位点作为研究对象,并不能反映患者体内病毒的真实状态,具有一定的局限性.为进一步了解HBV的生物学特性对干扰素疗效的影响,本研究采用全基因克隆的方法从CHB患者血清中扩增HBV全基因组DNA,分离检测HBV基因组缺失突变体,分析HBV变异与干扰素疗效之间的关系.
- 苏智军李志军林成祖郭如意林旭
- 关键词：基因组DNA乙型肝炎病毒抗干扰素HBV变异
- 23株HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者病毒的全基因组分析被引量：4
- 2011年
- 目的研究HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBV变异特点。方法 PCR扩增并克隆HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清中HBV全基因组DNA,测序并进行基因结构分析。结果获得23株HBV全基因组DNA,它们均属于C或B基因型。与中国HBV B、C基因型参照序列相比,HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者来源的HBV在表面抗原、P蛋白、X蛋白的反式激活区及增强子II/核心启动子区发生了一些有意义的共有变异。结论 HBV变异可能与HBeAg阳性慢性乙型肝炎的发生、发展有关。
- 李志军苏智军林成祖郭如意林万松
- 关键词：乙型肝炎病毒基因变异全基因组
- 458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白TSR′r′对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制。方法PCR扩增TSR′r′编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC。以FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA;以融合表达多肽表位抗体为一抗,Western blot检测目的蛋白的表达;用Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化,并以半定量RT-PCR进一步验证。结果成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TSR′r′,转染48 h后在Huh7细胞中表达TSR′r′蛋白。TSR′r′导致Huh7细胞载脂蛋白H等27个基因转录上调,其中包括5种代谢相关基因,7种免疫相关基因,7种胶原及胞外基质基因,5种干扰素诱导蛋白基因;TSR′r′还导致Huh7细胞核受体共激活物1基因在内的7种基因转录下降。结论458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白可能多方面影响肝细胞功能,具有重要的致病意义。
- 黄连真王林陈金烟林万松林建银林旭
- 关键词：RNA剪接
- 乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP257抗α-干扰素机制初步探讨
- 2011年
- 目的筛选与乙型肝炎病毒DNA聚合酶N端257个氨基酸(TP257)相结合的抗α-干扰素(IFN-α)相关性肝细胞蛋白,初步探讨TP257抗IFN-α作用机制。方法构建TP257腺病毒穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-TP257,并与腺病毒骨架载体pADEasy-1重组,以293A细胞包装重组腺病毒。用重组腺病毒感染Huh7细胞并以IFN-α诱导,收获细胞蛋白,Western blot验证TP257蛋白在细胞中的表达。细胞蛋白进行免疫沉淀,SDS-PAGE分离后通过质谱鉴定差异蛋白。结果构建的重组腺病毒AD-TP257能有效感染Huh7细胞并大量表达TP257蛋白。Huh7细胞感染AD-TP257后以IFN-α处理,并通过免疫沉淀筛选到4种差异蛋白,其中3种经肽质量指纹图谱鉴定分别为热休克蛋白60、组蛋白HIST1H2BC和肌凝蛋白调节轻链12A。结论 TP257抗IFN-α效应可能与它和特定肝细胞蛋白结合并相互作用有关。
- 梁菲菲黄连真陈婉南林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶Α-干扰素免疫沉淀
- 乙型肝炎病毒3022～1787核苷酸缺失突变体编码蛋白具有抗α干扰素作用
- 2009年
- 为证实乙型肝炎病毒(HBV)3022～1787核苷酸缺失突变体编码蛋白TS′X′(源于DNA聚合酶读码框架,T为TP区,S′为部分缺失的spacer区,X′为截短的X蛋白)具有抗α干扰素(IFN-α)作用并确定其功能区域,用聚合酶链反应(PCR)扩增获得TS′X′全长及片段TS′(含TP区及部分缺失的spacer区),并克隆于pcDNA3.1/HisC载体。重组质粒以FuGENE6转染Huh7肝细胞,48h后裂解细胞,以蛋白质印迹法(Western blot)证实目的蛋白可在Huh7肝细胞中表达。重组质粒及空载体pcDNA3.1/HisC分别与IFN-α反应报告质粒p6-16CAT按分子数5∶1、10∶1、15∶1、30∶1共转染Huh7肝细胞,转染后48h给予终浓度为100IU/ml的IFN-α2a刺激,作用24h后裂解细胞,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胞内氯霉素乙酰基转移酶(CAT)含量。结果显示,与空白载体相比,随着TS′X′及TS′重组表达质粒转染量的递增,Huh7胞内CAT值逐渐降低(n=6,P<0.05),但TS′X′与TS′之间无显著差异(n=6,P>0.05)。本研究证实,HBV3022～1787核苷酸缺失突变体编码的TS′X′蛋白可抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性,其活性与其N端TP及部分缺失的spacer区有关。
- 王林郭丹华焦伯延林万松林建银林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒缺失突变Α干扰素
